论文部分内容阅读
目的研究化疗及不同浓度藏红花素对急性白血病患儿骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及功能的影响。方法收集正常儿童,新发急性白血病患儿,化疗6个月及化疗1年后的急性白血病患儿骨髓各10例,全骨髓法培养出BMSCs,分别设为正常对照组(A),实验组分为新发组(B),化疗6月组(C)及化疗12月组(D),并通过流式细胞仪测定细胞表面标记分子CD44、CD105、CD29、CD73、CD34、CD45及HLA-DR的表达率,进行BMSCs鉴定。用含不同浓度藏红花素(0、0.3125mg/ml、0.625mg/m1、1.25mg/ml及2.5mg/ml)的低糖DMEM (L-DMEM)培养液分别培养各组BMSCs48h、72h及96h。倒置显微镜观察各组BMSCs形态及增殖情况；MTT法检测经不同浓度藏红花素、不同时间作用后的各组BMSCs增殖率;ELISA法测定作用96小时后各组细胞上清液干细胞因子(SCF)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果1.BMSCs膜抗原表达：各组均有99.5%以上细胞表面表达CD44、CD105、CD29及CD73,而表达CD34、CD45及HLA-DR的细胞均低于2%。2.BMSCs形态学变化：A组BMSCs形态规则,呈集落样或“结网样”迅速增殖,B组BMSCs形态较规则,但增殖速度明显低于正常对照组：C及D组BMSCs形态不规则,增殖速度明显低于A组。3.BMSCs增殖活性：实验各组BMSCs在藏红花素作用前培养48h、72h、96h后所测得0D值均低于A组0D值,差异有统计学意义(p<0.05),培养72h及96h后,D组0D值明显低于C组0D值,差异有统计学意义,(p<0.05)；加入不同浓度藏红花素培养96h后,BMSCs增殖率均明显提高(F值分别为19.85、5.42、9.31、9.58；p<0.05),当藏红花浓度从0.3125mg/ml-1.25mg/ml时,增殖率逐渐增加,以藏红花素浓度为1.25mg/ml时的增殖率最高,与其他各组比较均有显著性差异(p<0.05),当藏红花素浓度升高至2.5mg/ml时,各组细胞增殖率反而下降。4.BMSCs产生SCF及TNF-α水平：B组细胞产生SCF及TNF-α水平较A明显升高(p<0.05),C及D组明显低于B组(p均<0.05),D组明显低于C组(p<0.05),但C组TNF-α水平仍显著高于A组(p<0.05)。藏红花素作用后,A组细胞上清液中SCF水平明显下降(F=25.49;p<0.05),以1.25mg/ml浓度组最低；C及D组经藏红花素作用后,上清液SCF水平明显升高(F=4.69,17.46；p<0.05),以1.25mg/ml组最高,而A及C组经浓度为0.625mg/ml及1.25mg/ml藏红花素作用后,上清液中TNF-α水平明显下降(F=5.58,6.12；p<0.05),亦以1.25mg/ml浓度组下降最明显。结论1.急性白血病患儿治疗前BMSCs勺形态及细胞表型与正常BMSCs无明显差异,但其增殖活性明显降低,产生SCF及TNF-α水平异常增高,提示急性白血病患儿骨髓发生了造血微环境的紊乱。2.化疗6月后急性白血病患儿BMSCs占壁较前缓慢,形态不规则,增殖活性及产生SCF及TNF-α水平均明显降低,提示化疗可损伤BMSCs的形态、增殖活性及功能。3.化疗12月后急性白血病患儿BMSCs增殖活性及产生SCF及TNF-α水平均较化疗6月后明显减低,提示化疗强度越大,对BMSCs的损伤越明显。4.治疗前急性白血病患儿BMSCs经藏红花素作用后,增殖活性无明显改变,但产生SCF及TNF-α水平较前明显降低,提示藏红花素可调节急性白血病患儿造血微环境紊乱。5.化疗6月后急性白血病患儿BMSCs经藏红花素作用后产生TNF-α的水平明显降低,提示藏红花素可减轻造血抑制。6.化疗6月及12月后急性白血病患儿BMSCs经藏红花素作用后其增殖活性及产生SCF的水平明显升高,提示藏红花素可促进化疗后受损的BMSCs增殖活性及功能的恢复。