论文部分内容阅读
第一部分蛋白酪氨酸磷酸酶受体B在结肠癌转移中的作用及机制研究研究目的:结直肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,其发病率和死亡率在所有恶性肿瘤中居第2位,肿瘤转移是影响结直肠癌患者远期生存的重要因素。蛋白质酪氨酸磷酸酶受体B(PTPRB)是蛋白酪氨酸磷酸酶家族的一员,有研究证实PTPRB功能失调与多种肿瘤的发生及发展有关,然而它在结直肠癌转移中的作用尚不清楚,在本研究中,我们将探索PTPRB在结直肠癌转移中发挥的作用,并明确其内在的分子机制。材料及方法:选取3种人结直肠癌细胞系(LOVO、HCT116、HT29),实时荧光定量PCR技术(RT-PCR)和蛋白免疫印迹技术(Western-blot)检测各细胞系中PTPRB基因及蛋白的表达水平,细胞划痕实验和细胞侵袭转移实验(Transwell)检测各细胞系侵袭转移能力。小干扰RNA(siRNA)或过表达质粒分别敲除或上调结肠癌细胞中PTPRB的表达,观察敲除或过表达PTPRB后各结肠癌细胞侵袭转移能力的变化。免疫荧光实验观察结肠癌细胞表型,RT-PCR和Western-blot检测上皮间质化(EMT)相关蛋白的表达情况,探索PTPRB与结直肠癌EMT的关系。siRNA敲除EMT相关转录因子Twist1后,检测PTPRB对结肠癌细胞侵袭转移能力的影响。将裸鼠分成四组,分别用PTPRB-sh RNA、空白质粒和PTPRB过表达质粒处理HCT116,经尾静脉注射建立肿瘤转移动物模型,观察各组小鼠转移瘤形成情况,Western-blot检测各组转移瘤中PTPRB及EMT相关蛋白的表达水平。研究结果:结直肠癌细胞中PTPRB表达水平与细胞侵袭转移能力呈正相关,下调PTPRB后结直肠癌细胞侵袭转移能力减弱,上调PTPRB则增强结肠癌细胞侵袭转移能力。PTPRB表达高的LOVO中波形蛋白(Vimentin)表达高,上皮性-钙粘蛋白(E-cadherin)表达水平低,PTPRB表达低的HT29则相反。上调PTPRB后,结直肠癌细胞中Vimentin表达增高;下调PTPRB后E-cadherin表达增高。PTPRB与Twist1的表达呈正相关,敲除Twist1后,上调PTPRB不能增强细胞的侵袭迁移能力。在体内模型中,PTPRB过表达质粒组小鼠转移瘤数量高于对照组、空白质粒组及PTPRB-sh RNA组,PTPRB过表达质粒组小鼠转移瘤组织中Vimentin表达高,而E-cadherin表达低。研究结论:本实验结果表明,PTPRB通过调节转录因子Twist1,引起E-cadherin的表达下调和Vimentin的表达上调,诱导结肠癌肿瘤细胞发生EMT,从而增强结肠癌细胞的侵袭转移能力。第二部分PTPTB与结肠癌的患者预后的关系研究目的:肿瘤转移是影响结直肠癌预后的重要因素之一,在第一部分研究中我们发现PTPRB能够诱导结直肠癌细胞发生EMT,进而增强肿瘤远处转移的能力。因此在本实验中,我们将检测结肠癌手术患者癌及癌旁组织中PTPRB的表达情况,比较癌与癌旁组织中PTPRB表达的差异,分析肿瘤组织中PTPRB表达水平与患者预后的关系。材料及方法:收取455例结肠癌病人标本及与其配对的癌旁正常组织(275例)并制成组织芯片,免疫组化检测癌组织及癌旁组织中PTPRB的表达水平,分析癌与癌旁组织中PTPRB表达的差异。根据癌组织中PTPRB的表达情况将患者分为低表达组及高表达组,分析PTPRB表达情况与结肠癌患者年龄、性别、TNM分期和术后转移等风险因素之间的相关性。同时对患者术后生存信息进行随访,统计患者生存时间,探索PTPRB表达情况与结肠癌患者预后之间的关系。研究结果:研究发现PTPRB在结肠癌肿瘤组织表达水平高于癌旁组织,其表达情况与患者年龄、性别、肿瘤病理分级和TNM分期等风险因素之间无明显相关性。PTPRB高表达组与低表达组患者之间远期生存率无明显差异。研究结论:PTPRB在结肠癌肿瘤组织中高表达,但是PTPRB表达水平对结肠癌患者预后无明显影响。