【摘 要】
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目的:本课题旨在研究转录因子人叉头框蛋白N2（FOXN2）在各级别胶质瘤中的表达情况,并通过体外调控FOXN2观察其在胶质母细胞瘤系（GBM）U87和U251中的增殖、侵袭和迁移能力,探讨FOXN2对GBM的影响及作用机制,为临床上了解和治疗GBM提供相关理论依据以及新思路。方法:首先新鲜的正常脑组织（脑外伤患者）、低级别胶质瘤（WHOⅡ）和高级别胶质瘤（WHOⅣ）各6例来自弋矶山医院神经外科手术
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目的:本课题旨在研究转录因子人叉头框蛋白N2（FOXN2）在各级别胶质瘤中的表达情况,并通过体外调控FOXN2观察其在胶质母细胞瘤系（GBM）U87和U251中的增殖、侵袭和迁移能力,探讨FOXN2对GBM的影响及作用机制,为临床上了解和治疗GBM提供相关理论依据以及新思路。方法:首先新鲜的正常脑组织（脑外伤患者）、低级别胶质瘤（WHOⅡ）和高级别胶质瘤（WHOⅣ）各6例来自弋矶山医院神经外科手术室,对其进行免疫印迹蛋白法（Western Blot）、定量实时聚合酶链反应（q RT-PCR）,检测在正常脑组织、低级别胶质瘤和高级别胶质瘤中FOXN2的表达情况,并使用CGGA数据库对FOXN2表达量与胶质瘤患者生存时间的关系进行分析。其次,从皖南医学院第一附属医院弋矶山医院病理科调取46例（分级为WHOⅠ、WHOⅡ、WHOⅢ、WHOⅣ）胶质瘤组织标本,对胶质瘤组织标本进行免疫组织化学和免疫荧光染色,在不同级别的胶质瘤组织中检测FOXN2的表达状况。然后,通过体外细胞实验培养HA、U87和U251细胞系,运用Western Blot实验检测FOXN2、TGF-β1在HA和GBM细胞系（U87、U251）中的表达差异,针对FOXN2的表达情况进行调控,用FOXN2过表达慢病毒转染U87和U251细胞系,在建立稳定的细胞系后,通过Western Blot和q RT-PCR检测细胞系的转染效率。此外,再对过表达FOXN2的细胞株进行细胞活力检测MTT实验、细胞划痕实验、平板克隆实验、Transwell实验和裸鼠皮下成瘤等实验方法检测FOXN2过表达后对GBM细胞系的影响,最后运用Western Blot实验比较FOXN2过表达组和对照组中TGF-β1的表达情况。结果:1.Western Blot和q RT-PCR实验结果表明,在正常脑组织中FOXN2的表达要高于低级别胶质瘤和高级别胶质瘤（P＜0.05）。CGGA数据库分析可知FOXN2的表达量与胶质瘤患者的生存时间有关,即如果胶质瘤患者中FOXN2的表达增加,则可得到患者生存时间随之变长（P＜0.05）。2.通过免疫组织化学实验与免疫荧光实验表明,随着胶质瘤级别的升高,FOXN2的阳性表达呈梯度降低（P＜0.05）。3.体外细胞实验结果进一步表明,HA细胞系中FOXN2的表达量显著高于GBM细胞系（U87和U251）,而TGF-β1在U87、U251中的表达量高于HA细胞系。4.通过慢病毒转染GBM细胞系后,Western Blot和q RT-PCR实验表明慢病毒转染成功（P＜0.05）,在此基础上进行MTT实验、细胞划痕实验、平板克隆实验、Transwell实验和裸鼠皮下成瘤等实验表明,FOXN2过表达组可显著抑制GBM细胞的增殖、侵袭和迁移,同时可抑制裸鼠皮下移植瘤的生长并促进肿瘤凋亡（P＜0.05）。5.最后通过Western Blot实验表明,过表达FOXN2组中TGF-β1的表达远低于对照组（P＜0.05）。结论:FOXN2在胶质瘤组织和GBM细胞系中均为低表达,而TGF-β1在GBM细胞系中为高表达,表明FOXN2在胶质瘤中可能为抑癌基因。而上调FOXN2的表达可抑制GBM细胞系的侵袭和迁移性并降低TGF-β1的表达,提示FOXN2抑制GBM的发生发展很可能与TGF-β通路有关。因此FOXN2很有可能成为治疗胶质瘤新的潜在靶点和预后生物指标。
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