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目的:通过检测地塞米松(Dex)对TNF-α诱导的人牙龈上皮细胞(HGECs)表达β-防御素-1,2(hBD-1、h BD-2)和炎症因子IL-1β、IL-6的影响及核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)等相关信号通路蛋白的活化情况,探讨地塞米松对口腔上皮免疫的影响及作用机制。方法:1.将临床取材的正常人牙龈组织采用酶消化培养法获取原代牙龈上皮细胞。选用10ng/ml TNF-α诱导第三代牙龈上皮细胞24h。另一组选用p38MAPK抑制剂或NF-κB抑制剂分别孵育细胞2h后,再用10ng/ml TNF-α诱导细胞24h。提取细胞总RNA检测hBD-2 mRNA的表达量。2.不同浓度Dex(0.1,1,10μM/L)分别培养第三代HGEC 2h后再加入10ng/ml TNF-α诱导细胞24h。取贴壁细胞用于提取总RNA进行实时荧光定量PCR(Real Time-PCR)检测hBD-1 mRNA、hBD-2 mRNA、IL-1βmRNA、IL-6 mRNA的表达。取贴壁细胞用于提取细胞总蛋白行Western Blot(WB)检测p-p65NF-κB、p65NF-κB和p-p38MAPK、p38MAPK蛋白的活化程度以及p65NF-κB蛋白的核转位情况。所有实验重复三次。采用SPSS17.0软件进行分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示,多组间比较采用方差分析,两组间比较采用独立样本t检验;以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.10ng/ml TNF-α能诱导HGECs hBD-2 mRNA表达量明显升高。而在p38MAPK或NF-κB抑制剂存在的情况下,10ng/ml TNF-α诱导的HGECs h BD-2 mRNA相对表达量明显降低(P<0.05)。2.Dex对TNF-α诱导的HGECs表达hBD-1 mRNA、hBD-2 mRNA、IL-1βmRNA、IL-6 mRNA的影响。各组间HGECs hBD-1 mRNA相对表达量进行比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。TNF-α能诱导HGECs hBD-2 mRNA、IL-1βmRNA、IL-6 mRNA表达量升高(P<0.05);在1、10μM/L Dex存在下,TNF-α诱导的HGECs hBD-2 mRNA相对表达量下降(P<0.05);0.1、10μM/L Dex也能使TNF-α能诱导的IL-1βmRNA相对表达量下降(P<0.05);0.1、1、10μM/L Dex均能使TNF-α能诱导的IL-6 mRNA相对表达量明显下降(P<0.05)。3.不同浓度Dex对TNF-α诱导的HGECs hBD-2 mRNA表达的通路蛋白活化情况。10ng/ml TNF-α能使HGECs p65NF-κB、p38MAPK通路蛋白明显激活,p-p65NF-κB、p-p38 MAPK蛋白的相对表达量明显升高(P<0.05)。在1、10μM/L Dex的存在下,TNF-α诱导的HGECs p-p65NF-κB蛋白相对表达量降低(P<0.05)。而0.1、1、10μM/L Dex均能使TNF-α能诱导的HGEC p-p38MAPK相对表达量明显下降(P<0.05),且随着Dex浓度的逐渐升高p-p38MAPK蛋白相对表达量也逐渐下降。4.TNF-α能诱导p65NF-κB蛋白在HGECs核内表达明显升高,0.1、1、10μM/L Dex均能使TNF-α诱导的p65NF-κB在HGECs核内的表达明显降低。结论:Dex能通过NF-κB、p38MAPK信号通路下调TNF-α诱导的HGECs hBD-2 mRNA、IL-1βmRNA、IL-6 mRNA的表达。TNF-α诱导HGECs hBD-2 mRNA表达机制可能与p38MAPK和NF-κB信号通路有关。