目的:研究人肥大细胞系（HMC-1）机械敏感性离子通道的电学特性;建立适用于膜片钳记录的外周组织片模型,并进一步对其中原位肥大细胞（mast cell,MC）的机械敏感性进行验证。方法:（1）在光镜显微镜下观察低渗环境导致HMC-1细胞处于高应力状态中对该细胞脱颗粒的影响。（2）利用荧光成像技术,以钙绿（Calcium Green-1 AM）为荧光指示剂,测量低渗环境中HMC-1胞内Ca²⁺浓度_i)的变化。（3）在膜片钳外面朝外（outside-out）和细胞吸附（cell-attached）两种模式下,通过膜片钳记录电极对细胞膜施加正压（+30～+60 cmH₂O）或负压（-60～-30 cm H₂O）刺激,测量和分析HMC-1上张力激活性（stretch-activated,SA）离子通道的单通道特性。（4）制备大鼠“后三里”穴区（ST36）皮下结缔组织片,用甲苯胺蓝（Toluidineblue,TB）或中兴红（Neutral red,NR）染色观察组织片内MCs的分布,并用膜片钳全细胞（whole-cell）模式对组织片内原位MCs的SA电流进行记录。结果:（1）在230 mOsm/kg的低渗细胞外液中,处于稳定状态的HMC-1细胞会在5～30分钟内出现脱颗粒现象,脱颗粒率为54.9±8.5%（n=4个独立实验,P≤0.01）（mean±SEM）。低渗环境导致HMC-1脱颗粒效应可被Cl^-通道阻断剂DIDS和香草精受体TRPV2阻断剂SKF96365抑制,脱颗粒率分别下降到17.7±5.4%（n=4个独立实验,P≤0.05）和22.2±7.9%（n=2个独立实验）。（2） 250 mOsm/kg的低渗细胞外液能增加HMC-1胞内相对钙荧光强度,荧光强度从对照组的100%上升到116.7±3.6%（n=52,5个独立实验,P≤0.01）。TRPV蛋白阻断剂钌红（ruthenium red,RuR）、SKF96365和DIDS能取消或抑制该增强效应,胞内相对钙荧光强度分别下降到100.3±0.9%（n=41,3个独立实验,P≤0.01）、103.7±3.2%（n=30,3个独立实验,P≤0.05）和67.8±5.2%（n=29,4个独立实验,P≤0.01）。（3）在膜片钳实验中,直接的压力牵张可激活HMC-1细胞SA通道。SA单通道电流表现出较强的外向整流性。+100 mV膜电位下的通道电导为55.1±3.4 pS（n=38）。SA通道的开放概率（open probability,P_o）具有电压依赖性,在正膜电位下急剧增大;并且具有压力依赖性,P_o随着外界压力的增加而增大,在+20 mV膜电位下,达到最大P_o值一半所需的压力为26.4 cm H₂O。在+60mV膜电位下,通道开放时间分布（open-time distribution）能被3个指数函数拟合,时间常数分别为τ_1o=755.1 ms、τ_2o=166.4 ms和τ_3o=16.5 ms;通道关闭时间分布（closed-time distribution）也能被3个指数函数拟合,时间常数分别为τ_1c=661.6 ms、τ_2c=253.2 ms和τ_3c=5.6 ms。（4） HMC-1细胞的SA单通道活动具有细胞外Cl^-浓度（[Cl^-]_o）依赖性（n=9）。当[Cl^-]_o由169 mM降低到19 mM后,+100mV膜电位下的电导从44.2±4.4 pS下降到15.1±1.6 pS（P≤0.01）。在+60 mV膜电位下,P_o降低到对照组的62.2±13.6%（P≤0.01）。V_1/2从5.5±2.7mV上升到45.6±6.9 mV。（5） HMC-1细胞SA单通道活动可被Cl^-通道阻断剂DIDS可逆性抑制（n=9）。+100 mV膜电位下的电导从58.5±4.1 pS下降到18.9±7.0 pS（P≤0.01）。+60 mV膜电位下,P_o降低到对照组的20.6±1.4%（P≤0.01）。（6）用细胞松弛素B（cytochalasin B,CB）断裂细胞骨架后发现,激活SA通道所需的压力降低。（7）大量MCs分布在大鼠“后三里”穴区（ST36）的皮下结缔组织片内。和HMC-1类似,大鼠原位MCs也同样表达机械敏感性离子通道。SA通道的全细胞电流表现出外向整流性,并随外界压力的增加而增大。+100 mV膜电位下,由-60 cm H₂O激活的SA通道的电导为83.2±25.5 pS,翻转电位约为-35.8 mV。结论:HMC-1脱颗粒效应可被机械刺激激活,DIDS敏感性Cl^-通道和TRPV2蛋白参与HMC-1机械敏感性机制,并且[Ca²⁺]_i增加可能是该机制中重要的信号途径之一。这种机械敏感性在大鼠原位MCs上也进一步得到了证实。