通过胚挽救创制甘蓝Ogura CMS BC1代育性恢复材料

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xieyinglan2007
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为培育出甘蓝Ogura CMS育性恢复材料,可以利用远缘杂交结合胚挽救的方法在甘蓝中转入甘蓝型油菜的恢复基因。本研究已获得甘蓝×甘蓝型油菜F1代育性恢复材料,但这些材料还存在甘蓝型油菜的遗传背景,仍需对种间杂种加倍后回交,以此降低油菜的遗传背景。本试验以甘蓝×甘蓝型油菜F1代为父本,以甘蓝Ogura雄性不育系为母本,两者进行有性杂交,通过B5固体培养基对胚珠进行胚挽救,培育BC1代植株,筛选出BC1代植株胚挽救的最适宜的取材时期、培养基添加成分和最佳杂交组合。从两个方面对BC1代植株的真实性进行鉴定,一方面通过流式细胞仪进行倍性鉴定,另一方面利用分子标记进行鉴定。本研究得出如下结论:1.通过秋水仙素对36株三倍体F1代杂种植株进行不同浓度、不同时间的加倍处理。其中,秋水仙素浓度为2.5 g/L,处理时间为2 d处理组合效果最佳;2.经胚珠离体培养后共得到杂交种61株。胚珠离体培养以授粉后14 d、培养基成分为B1(NAA 0.05mg/L+TDZ 0.2mg/L+MT 0.5 mg/L)、杂交组合为MS15×RFO-32胚珠成苗率效果最高,共获得61株BC1代植株。选择适宜杂交组合、培养基成分和取材时期对幼胚成苗率起到促进作用;3.通过流式细胞仪进行倍性鉴定结果表明,44株BC1代幼苗的G1期荧光强度峰值位于220,对应的横坐标位置大约是甘蓝亲本荧光峰值的二倍,因此推测44株BC1代杂种幼苗为四倍体植株。利用分子标记对双亲与四倍体杂种株进行特异性条带扩增,38株四倍体杂种的特异性条带均与父本一致,表明其有恢复基因。4.通过胚挽救成功创制出38株甘蓝Ogura CMS BC1代育性恢复材料,筛选出了最适甘蓝BC1代胚挽救技术以及杂种株鉴定方法的甘蓝育种技术。
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