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胃癌是一严重危害着全世界人民健康的恶性肿瘤,在全球范围内占所有癌症的7.8%,居全球肿瘤发病率及病死率的第2位,我国也是胃癌高发区。由于胃癌早期缺乏典型的临床表现,多数患者在确诊时已处于进展期,甚至已发生转移,预后较差。浸润转移是胃癌主要的致死性原因,因此探明其浸润转移机制,为发展新的治疗策略提供有力的理论依据而显得尤为迫切和重要。HER-2又称neu、 ErbB-2、 C-erbB-2或P185,是具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜糖蛋白,为EGFRs家族的一员,通常只在胎儿时期表达,成年后只出现在少数正常组织中。在正常情况下,HER-2表达非常低,可参与细胞生长、增殖和分化的调节。当受到某些致癌因素作用后,其结构或表达失控而被激活,促使细胞发生恶性转化,并加速肿瘤细胞运动,导致肿瘤的浸润及转移。多数研究发现,HER-2在胃癌中存在过表达或基因扩增现象,影响胃癌患者的预后,也可能参与了胃癌的发生、发展、浸润、淋巴结转移及胃癌肝转移过程。人类Fascin1基因属于Fascin家族,编码产物为分子量55KD、是能与F-肌动蛋白结合的细胞骨架蛋白,定位于细胞质张力纤维和细胞膜皱褶(ruffles)边缘的丝状伪足、微棘(microspikes)的核心肌动蛋白束中,而细胞形成的伪足和微棘与细胞运动、癌细胞的侵袭与转移等密切相关。Fascinl蛋白在正常神经组织中表达,而在上皮细胞中不表达或低表达,近年来的研究发现在一些上皮组织肿瘤如乳腺癌、胰腺癌和卵巢癌等中常表达上调,尽管在胃癌患者中Fascin1表达率不高(25%),但它的表达与胃癌的浸润、淋巴结转移、TNM分期和复发密切相关。Twist属于碱性的螺旋-环-螺旋(Basichelix loop helix, bHLH)蛋白家族中的高度保守的转录因子,其蛋白分子量为26kD,在胎盘和中胚层来源的组织和细胞中呈高表达,广泛参与调控器官生长发育、肿瘤发生、细胞增殖分化等过程。最近Twist被认为是癌基因蛋白,影响肿瘤细胞的凋亡,并作为上皮-间质转型(epithel ial-mesenchymal transition, EMT)过程中的关键调控因子,对肿瘤的侵袭和转移有重要影响。近几年研究表明Twist与胃癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期以及远处转移明显相关。目的：研究HER-2基因对胃癌细胞侵袭和转移特性的影响,探讨HER-2基因与促肿瘤浸润和转移分子如Fascin1和Twist的相互关系,为HER-2作为靶的胃癌基因治疗提供理论基础和实验依据。方法：1.培养胃癌细胞SGC7901、 BGC823、 MKN45。2.利用脂质体介导转染技术,分别转染质粒HER-2(CA), HER-2(KD), HER-2(WT)和空白质粒载体(PCDNA3)到MKN45细胞和SGC7901细胞,以空白质粒载体转染组为阴性对照,以空白转染组(本底细胞)为空白对照。3.利用脂质体介导转染技术,分别转染干扰质粒Neu-shRNA, Control-shRNA于BGC823细胞,以空白质粒载体转染组为阴性对照,以空白转染组(本底细胞)为空白对照。4.逆转录聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测不同转染组SGC7901细胞,MKN45细胞,BGC823细胞的HER-2和Fascin1的mRNA水平,并分析HER-2和Fascin1的相关性。5.用Western blotting的方法比较不同转染组SGC7901细胞,MKN45细胞,BGC823细胞HER-2, Fascinl, Twist和E-cadherin的蛋白表达,并分其相关性。6.用Transwell侵袭小室,Transwell迁移实验和细胞划痕实验：检测转染HER-2(CA), HER-2(WT)质粒后MKN45细胞侵袭迁移能力变化；检测转染Neu-shRNA, Control-shRNA质粒后BGC823细胞侵袭迁移能力变化。结果：1.与空白质粒转染对照组(Control-shRNA-BGC823)和未转染组BGC823细胞相比,在干扰质粒转染组(Neu-shRNA-BGC823)细胞中,HER-2和Twist表达下调(P<0.05),E-cadherin表达上调(P<0.05),Fascin1表达无变化(P>0.05)。2.与空白质粒转染对照组PCDNA3-MKN45和未转染组MKN45细胞相比,在质粒(HER-2CA, HER-2KD, HER-2WT)转染组HER-2-MKN45细胞中,HER-2和Twist表达上调(P<0.05),E-cadherin表达下调(P<0.05),Fascinl表达无变化(P>0.05),同时在另外一株胃癌细胞株SGC7901中得到相同的结论。3.与空白质粒转染对照组(Control-shRNA-BGC823)和未转染组BGC823细胞相比,干扰质粒转染组(Neu-shRNA-BGC823)细胞的迁移能力和侵袭能力明显降低(P<0.05)；划痕实验结果也表明,干扰质粒转染组细胞的愈合能力明显减弱(P<0.05)。4.与空白质粒转染对照组PCDNA3-MKN45和未转染组MKN45细胞相比,质粒(HER-2CA, HER-2WT)转染组HER-2-MKN45细胞迁移能力和侵袭能力明显增加(P<0.05)；划痕实验结果也表明,HER-2质粒转染组细胞的愈合能力明显增强(P<0.05)。结论：1.HER-2增强胃癌细胞的侵袭和迁移能力。2.HER-2通过上调Twist,调控E-cadherin的表达促进胃癌的侵袭和转移。3.在转染HER-2干扰质粒和HER-2质粒于胃癌细胞后,Fascinl都无明显变化,说明HER-2介导胃癌的侵袭和转移与Fascinl无关。