【摘 要】
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目的:作为表皮生长因子受体（EGFR）的配体之一,EPGN（Epithelial mitogen）与肿瘤发生发展的相关性极少有人研究,而EPGN与头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）发病尤其是与鼻咽癌的增殖、侵袭、转移的相关研究尚未见报道。本次研究的目的是通过研究EPGN在HNSCC尤其是鼻咽癌细胞侵袭,转移中的作用,为鼻咽癌的诊断和治疗提供一种新的分子标志物,并进一步研究其生物学功能可能的分子机制。方
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目的:作为表皮生长因子受体（EGFR）的配体之一,EPGN（Epithelial mitogen）与肿瘤发生发展的相关性极少有人研究,而EPGN与头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）发病尤其是与鼻咽癌的增殖、侵袭、转移的相关研究尚未见报道。本次研究的目的是通过研究EPGN在HNSCC尤其是鼻咽癌细胞侵袭,转移中的作用,为鼻咽癌的诊断和治疗提供一种新的分子标志物,并进一步研究其生物学功能可能的分子机制。方法:1、通过免疫组化法检测不同TNM分期的HNSCC组织芯片HN803b中EPGN的表达差异,明确EPGN与HNSCC发生发展的相关性。2、从GEO数据库中下载与HNSCC中EPGN表达有关的数据集GSE39366,通过基因富集分析判断与EPGN高表达相关的生物学功能或信号通路。3、构建EPGN的过表达和干扰质粒,分别转染鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞。4、通过CCK-8、Tunel、划痕分析、Transwell、管腔形成及细胞黏附实验分别检测过表达或下调EPGN表达后,对鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞增殖、凋亡、转移、侵袭和黏附的影响,以及对HUVEC细胞血管形成的影响。5、通过免疫组化法检测不同TNM分期的HNSCC组织芯片HN803d中EGFR的表达差异,明确EPGN的受体EGFR与HNSCC发生发展的相关性。6、通过单克隆抗体和划痕实验初步证明EPGN发挥相关生物学功能与其受体EGFR相互作用的相关性。7、通过Western blot研究EPGN与鼻咽癌侵袭转移的相关分子机制,以及从分子表达水平进一步验证EPGN发挥相关生物学功能与其受体EGFR相互作用的相关性。结果:1、HNSCC组织中EPGN的表达显著高于正常组织（P<0.05）,N2期的HNSCC组织中EPGN的表达显著高于NO期,差异具有显著统计学意义（P<0.05）,而EPGN在不同T分期和grade分级的HNSCC组织中的表达量无明显统计学差异（P>0.05）。2、基因富集分析结果表明EPGN高表达与HNSCC转移相关。3、下调EPGN在鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞中的表达后,与对照组相比这两种肿瘤细胞的增殖能力出现了显著下降（P<0.05）,细胞凋亡率提高（P<0.05）,而细胞的侵袭、转移及黏附能力与对照组相比也均出现显著下降（P<0.05）。4、在HUVEC细胞中上调EPGN的表达后,HUVEC细胞的血管形成能力与对照组相比出现了显著增强（P<0.05）。5、HNSCC组织中EGFR的表达显著高于正常组织（P<0.05）,而EGFR在不同TNM分期的HNSCC组织中的表达均无统计学差异（P>0.05）。6、单克隆抗体实验证明EPGN可以通过与EGFR以配受体结合方式促进鼻咽癌细胞转移。7、过表达EPGN可以上调鼻咽癌CNE-1和 CNE-2 细胞中 MMP-9 及 Vimentin 的表达（P<0.05）,和下调 E-Cadherin 的表达量（P<0.05）。结论:EPGN与HNSCC的淋巴结转移相关;下调EPGN的表达可以促使鼻咽癌细胞凋亡;其高表达可以通过上调MMP-9及Vimentin和下调E-Cadherin等侵袭转移相关蛋白分子的表达促进鼻咽癌细胞的侵袭、转移、黏附以及肿瘤的血管形成;EPGN发挥相关生物学功能需要与其受体EGFR相互作用实现。
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