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第一部分小檗碱治疗性给药对糖尿病大鼠早期离体小肠平滑肌形态及功能的影响目的:探讨小檗碱对早期糖尿病大鼠小肠病变的治疗作用。方法:将体重为180~220 g的雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、小檗碱治疗给药组,通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ,60mg·kg-1)建立糖尿病大鼠模型,72 h后尾静脉取血,以空腹血糖值大于16.7 mmol·L-1视为诱导糖尿病大鼠模型成功。小檗碱治疗给药组于造模成功2周后每天灌胃给予200 mg·kg-1小檗碱,连续给药2周。运用电场刺激诱发神经源性收缩反应及离体器官肌张力测定方法,分析离体小肠平滑肌的收缩功能;组织石蜡切片HE染色法,观察小肠组织形态学变化,探讨小檗碱对早期糖尿病大鼠小肠病变的治疗作用。结果:1各组大鼠体重及血糖的变化与同周期正常对照组大鼠相比,糖尿病模型组、小檗碱给药组大鼠的体重明显降低(P<0.01);与糖尿病模型组大鼠相比,小檗碱给药组大鼠的体重无明显差异(P>0.05)。与同周期正常对照组大鼠相比,糖尿病模型组、小檗碱给药组大鼠的血糖值明显升高(P<0.01);小檗碱治疗给药对血糖无明显改善。2小檗碱对电场刺激诱发糖尿病大鼠小肠平滑肌收缩反应的影响正常对照组、糖尿病模型组和小檗碱治疗给药组大鼠小肠平滑肌标本均可在电场刺激条件下诱发稳定、重现的收缩反应,收缩反应无明显差异;收缩反应均可被1μmol·L-1阿托品和0.1μmol·L-1河豚毒素(TTX)完全阻断。3小檗碱对糖尿病大鼠小肠平滑肌NO递质合成及胆碱能神经反应性的影响100μmol/L L-NAME浴槽内给药,电场刺激诱发小肠平滑肌收缩反应在各组大鼠均未见明显改变(P>0.05)。1μmol/L新斯的明浴槽内给药显著增加电场刺激诱发大鼠小肠平滑肌的收缩反应(P<0.05,P<0.01)。新斯的明给药前后电场刺激引起收缩反应的差值反应胆碱能神经功能,与正常大鼠相比,糖尿病大鼠空肠收缩反应的差值明显降低(P<0.01),而小檗碱给药对糖尿病大鼠的胆碱能神经功能降低未见明显改善(P>0.05)。结论:STZ诱导的早期糖尿病大鼠空肠组织形态发生明显病变,小肠平滑肌胆碱能神经功能的受损,而氮能神经无明显变化。小檗碱治疗性给药显著改善空肠形态学病变,对神经功能改变影响较小。第二部分小檗碱预防性给药对糖尿病大鼠小肠病变的影响及机制探索目的:探讨小檗碱对早期糖尿病大鼠小肠病变的预防作用。方法:将体重为180~220 g的雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和小檗碱预防给药组,通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ,60mg·kg-1)建立糖尿病大鼠模型,72 h后尾静脉取血,以空腹血糖值大于16.7 mmol·L-1视为诱导糖尿病大鼠模型成功。糖尿病模型组根据病程分为糖尿病2周,3周和4周组,以了解小肠病变与疾病发展过程的关系。小檗碱预防给药组于造模3天后每天灌胃给予200 mg·kg-1小檗碱,连续给药2周。运用组织石蜡切片HE染色法及肠系膜铺片法,观察小肠及系膜组织形态学变化;免疫组化法观察小肠上皮紧密连接蛋白的改变,并探讨小檗碱对早期糖尿病大鼠小肠病变的预防作用。结果:1各组大鼠体重及血糖的变化与同周期正常对照组大鼠相比,糖尿病模型各组、小檗碱给药组大鼠的体重明显降低(P<0.01);与糖尿病模型组大鼠相比,小檗碱给药组大鼠的体重无明显差异(P>0.05)。与同周期正常对照组大鼠相比,糖尿病模型各组、小檗碱给药组大鼠的血糖值明显升高(P<0.01);小檗碱预防给药对血糖无明显改善。2不同病程对大鼠小肠及系膜组织形态学影响及小檗碱预防给药的作用HE染色结果显示,正常对照组大鼠空肠绒毛排列整齐致密,绒毛结构完整,杯状细胞清晰且饱满,糖尿病模型组大鼠绒毛杂乱无序,绒毛断裂,杯状细胞数目减少,2周时即出现明显变化,并随病程延长组织病变加重;正常对照组大鼠空肠粘膜下层与肌层连接紧密,糖尿病模型组常见粘膜下层与肌层分离现象;小檗碱治疗给药及预防给药对糖尿病大鼠空肠组织学病变有明显改善;与正常对照组大鼠相比,糖尿病模型组大鼠内环肌、外纵肌肌层厚度增厚(P<0.01),绒腺比减小(P<0.05),小檗碱治疗给药对糖尿病大鼠肌层厚度增加及绒腺比减小的病变未见明显改善;小檗碱预防给药使糖尿病大鼠外纵肌厚度减小(P<0.01),绒腺比增大(P<0.05)。肠系膜铺片显微镜下显示,正常对照组大鼠肠系膜脂肪细胞大而饱满,弹性纤维较多且染色清晰;糖尿病不同时期组大鼠肠系膜脂肪细胞减小且密集,弹性纤维减少伴模糊不清,且在糖尿病2周时即出现明显病变;小檗碱预防性给药组大鼠肠系膜脂肪细胞和弹性纤维均未发生明显病变,与正常对照组相似。3不同病程对大鼠空肠组织上皮紧密连接蛋白表达的影响及小檗碱预防给药的作用免疫组化染色结果显示,与正常对照组大鼠相比,糖尿病模型各组紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达减少,在2周时即有明显差异;随着糖尿病病程的延长,紧密连接蛋白表达ZO-1表达逐渐降低,而Occludin表达在糖尿病2、3、4周无明显差异;与糖尿病大鼠相比,小檗碱预防性给药增加ZO-1和Occludin蛋白表达,并与正常大鼠相比无明显差异。结论:在STZ诱导的糖尿病不同时期,大鼠空肠病变随着病程延长不断加重,在2周时空肠组织形态及粘膜上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达已发生显著改变;肠系膜脂肪组织及弹性纤维病变明显。小檗碱预防性给药对糖尿病大鼠空肠组织形态病变及紧密连接蛋白表达降低均有明显预防作用,保护粘膜屏障;同时,对肠系膜脂肪及弹性纤维病变也有良好预防作用。