【摘 要】
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小麦是人类主要的粮食作物之一,盐胁迫可显着降低小麦产量和品质。采用常规育种方法改良小麦耐盐性面临诸多困难,有必要鉴定小麦耐盐相关基因进行分子育种研究。本研究采用生物信息学方法,从425个基因探针中筛选到2个盐应答候选基因,以小麦品种中国春为实验材料,进行盐胁迫处理,通过PCR方法验证候选基因的表达模式,得到1个在根中优势表达且盐胁迫诱导后表达显着上调的基因的探针Ta.5463.1.A1＿at。通过
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小麦是人类主要的粮食作物之一,盐胁迫可显着降低小麦产量和品质。采用常规育种方法改良小麦耐盐性面临诸多困难,有必要鉴定小麦耐盐相关基因进行分子育种研究。本研究采用生物信息学方法,从425个基因探针中筛选到2个盐应答候选基因,以小麦品种中国春为实验材料,进行盐胁迫处理,通过PCR方法验证候选基因的表达模式,得到1个在根中优势表达且盐胁迫诱导后表达显着上调的基因的探针Ta.5463.1.A1＿at。通过URGI Blast比对得到同源性最高的小麦B基因组上的同源基因,将该基因命名为Tasip。利用在线引物序列设计特异性引物克隆了启动子Tasipro3和Tasipro5。结果表明,生物信息学方法能有效地筛选出在植物特定组织和特定胁迫条件下优势表达的基因,提高了基因筛选的准确性。为了进一步验证启动子Tasipro3和Tasipro5的功能,本研究构建了适用于禾谷类作物启动子筛选的、具有除草剂抗性标记基因的表达载体p UKGS-Bar。该载体具有Gateway克隆组件用于重组启动子、用于驱动下游基因在禾谷类作物表达的Ubiquitin启动子和用于阳性植株筛选的Bar选择标记基因,而且GUS选择标记基因置于待分析启动子的控制下,因此可以利用GUS组织化学染色方法进行启动子功能验证。将克隆得到的启动子Tasipro3、Tasipro5与表达载体p UKGS-Bar进行重组连接,利用农杆菌花序侵染法转化拟南芥,GUS组织化学染色结果表明,启动子Tasipro3和Tasipro5受盐诱导并且在根部优势表达。该启动子在小麦耐盐分子育种中将具有较好的应用价值。
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