论文部分内容阅读
目的：基于干细胞移植的细胞心肌成形术（CCM）作为心肌梗死的治疗方式颇受关注，人羊膜干细胞包括人羊膜间充质干细胞和人羊膜上皮细胞，其在体外均具有向心肌样细胞分化的能力，可能是CCM新的细胞供源。方法：本实验采用机械法和胰酶-胶原酶分段消化法从人羊膜组织中分离hAECs和hAD-MSCs，流式细胞仪（FCM）和免疫组织化学染色鉴定表型。雄性SD大鼠80只，随机分为hAD-MSCs心外膜下移植组（n=14）；hAD-MSCs静脉移植组（n=13）；hAECs心外膜下移植组（n=14）；hAECs静脉移植组（n=13）；模型组（n=14）；假手术组（n=12）。以结扎大鼠左冠状动脉前降支造成急性MI治疗模型，所分离纯化的第三代hAD-MSCs和hAECs经Brdu标记后，在冠脉结扎后第7天，分别经心外膜下和舌下静脉两种途径注入到大鼠体内，模型组和假手术组注入等量无血清L-DMEM培养基。于移植前及移植后1w、4w和6w进行心脏超声、组织病理学、免疫组织化学、双重免疫荧光染色等检测，以观察植入的细胞在MI区的植活与分化，经静脉移植后在各脏器的分布情况，以及对心室重构和心功能的影响。结果：①所分离hAD-MSCs具有典型的间充质干细胞表型特征，高表达CD44和波形蛋白，不表达CD34、CD45以及HLA-DR、CD80和CD86；hAECs也具有干细胞表型特征，CD29、CD166、CD73和CK19表达阳性，不表达CD44、CD34、CD45、HLA-DR、CD80和CD86；②MI大鼠hAD-MSCs和hAECs移植各组左心室纤维化程度均明显低于模型对照组，新生血管数量高于模型对照组；③hAD-MSCs和hAECs经心外膜下和静脉移植后1W、4W和6W，MI区均可见Brdu阳性细胞，移植的hAD-MSCs和hAECs表达心肌特异蛋白连接蛋白-43、α-辅肌动蛋白和结蛋白。两细胞静脉移植后6w，脾脏中可见Brdu阳性细胞；④MI大鼠，经hAD-MSCs心外膜下和静脉移植后1w、4w和6w，EF分别为68.99±2.81％、64.13±3.48％和76.99±2.73％，以及65.23±3.21％、72.58±2.90％和66.45±4.53％；FS为35.76±2.06％、31.98±2.48％和41.26±2.41％，以及32.92±2.51％、37.88±2.18％和32.96±3.01％均显著高于模型对照组（均P<0.01）：经hAECs心外膜下和静脉移植后1w、4w和6w，MI大鼠，EF为63.01±2.79％、64.35±2.26％和69.87±3.91％，以及65.72±2.00％、65.52±3.56％和64.34±0.91％；FS为30.98±1.87％、31.11±1.55％和35.53±2.92％，以及32.21±1.35％、32.56±2.54％和30.79±0.63％均显著高于模型对照组（均P<0.01）；⑤hAD-MSCs经心外膜下和静脉移植移植后1w、4w和6w，LVAWd为0.14±0.01cm、0.12±0.01cm和0.16±0.02cm，以及0.16±0.01cm、0.15±0.01cm和0.16±0.02cm；LVAWs为0.20±0.02cm、0.18±0.02cm和0.21±0.03cm，以及0.23±0.02cm、0.21±0.02cm和0.24±0.02cm均明显高于对照组（均P<0.01）。hAECs经心外膜下和静脉移植移植后1w、4w和6w，LVAWd为0.13±0.01cm、0.17±0.01cm和0.17±0.01cm，以及0.12±0.01cm、0.11±0.01cm和0.12±0.02cm；LVAWs达到0.18±0.02cm、0.23±0.02cm和0.24±0.02cm，以及0.17±0.02cm、0.16±0.02cm和0.17±0.02cm均明显高于对照组（均P<0.01）。且心外膜下移植组与经舌下静脉移植组对心功能影响差异无显著意义（P>0.05）。结论：人羊膜干细胞可在大鼠心肌梗死原位分化成心肌细胞，延缓心室重构及改善心脏功能，提示人羊膜干细胞可能成为细胞心肌成形术的新的细胞来源。