非洲猪瘟（African Swine Fever,ASF）是由非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus,ASFV）感染引起的一种严重危害家猪和野猪的烈性传染病。鉴于ASFV基因组较为庞大,尚无合适的传代细胞系在体外繁殖病毒,而且病毒感染可诱导免疫抑制并形成持续感染等特性,因此,使用传统技术研制非洲猪瘟疫苗的尝试至今仍没有成功。已有研究表明,ASFV主要抗原蛋白p30、p54、p72具有良好免疫原性,能够诱导机体产生中和抗体,且多种蛋白协同免疫可增强疫苗的免疫效果,因此,研制抗非洲猪瘟的病毒活载体疫苗或许是一个不错的选择。本研究拟以本实验室构建的伪狂犬病毒双基因缺失毒株（JS-2012-△g E/g I）为载体,通过同源重组的方式将编码ASFV p30、p54、p72蛋白的基因片段以单独或者组合形式插入到载体病毒的US4-US6区域之间,期望获得可以表达ASFV相应抗原蛋白的一系列重组伪狂犬病毒疫苗候选毒株。分别表达ASFV p30、p54或p72抗原蛋白的重组伪狂犬病双基因缺失病毒株的构建和鉴定。以伪狂犬病双基因缺失毒株（JS-2012-△g E/g I）为骨架,通过同源重组方式成功拯救并筛选出一系列重组病毒并命名为JS-2012-Δg E/g I-p30、JS-2012-Δg E/g I-p54、JS-2012-Δg E/g I-p72。对构建出的一系列重组病毒进行相关的分子病毒学特性的验证及分析,实验结果表明,重组伪狂犬病毒与亲本毒JS-2012-△g E/g I具有相似的生长特性,编码ASFV相应抗原蛋白的目的基因完整地插入了JS-2012-△g E/g I的US4-US6区域中且不同代次的重组病毒均可以稳定表达插入的ASFV相应蛋白（p30、p54或p72）。共表达ASFV p30和p54抗原蛋白的重组伪狂犬病双基因缺失病毒株的构建及鉴定。以伪狂犬病双基因缺失毒株（JS-2012-△g E/g I）为骨架,通过同源重组技术构建、筛选并纯化出一株重组病毒JS-2012-Δg E/g I-p3054。对重组病毒JS-2012-Δg E/g I-p3054进行相关的分子病毒学特性的验证及分析,结果表明,重组病毒JS-2012-Δg E/g I-p3054与亲本毒（JS-2012-△g E/g I）具有相似的生长特性,编码ASFV相应抗原蛋白的基因完整地插入了JS-2012-△g E/g I的US4-US6区域中,免疫荧光试验证明不同代次的重组病毒均可以稳定表达ASFV p30和p54蛋白。非洲猪瘟和猪伪狂犬病均是严重危害养猪业健康发展的重要传染病,本实验构建的重组伪狂犬病毒载体病毒株进一步进行临床免疫效力评价后有望成为可以同时预防非洲猪瘟和伪狂犬病的病毒载体疫苗候选毒株,为非洲猪瘟的防控提供技术支持。