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目的:神经胶质细胞瘤是一种预示着不良预后的实体肿瘤。这种不良的预后由早期诊断的困难性和胶质瘤的高侵袭性导致。PTTG1被认为与肿瘤细胞的恶性程度和不良预后有关。但是,PTTG1是否与胶质瘤的高侵袭性有关尚未见报道。本研究探讨了PTTG1在胶质瘤细胞系中的表达,并检测转染后胶质瘤细胞系侵袭力的变化和AKT、ARK5磷酸化的变化,为胶质瘤的诊断和治疗提供实验依据。方法:体外培养人胶质瘤U87、U251和LN-299细胞系和人类正常星形细胞NHA细胞系于含抗生素和10%胎牛血清的1640细胞培养液中,并提取蛋白检测其中PTTG1的表达。取对数生长期的U87细胞做实验,细胞分3组:(1)U87细胞:常规培养,不做任何处理;(2)Scr/U87细胞:瞬时转染插入空载体做对照;(3)SiPTTG1/U87:瞬时转染插入目标片段PTTG1 siRNAs:5′-GACCCUGGAUGUUGAAUUG-3′。通过体外侵袭实验检测转染前后胶质瘤细胞系侵袭能力的改变。通过Western blot实验检测转染前后U87细胞中Akt,ARK5的磷酸化情况。结果:(1)对四种细胞系常规培养后,待细胞长到80%满,提取蛋白做Western blot检测。实验结果显示PTTG1在各恶性胶质瘤细胞系中均高表达,而在人类正常的星形细胞中不表达。(2)瞬时转染后继续培养72h,然后提取蛋白,应用Western blot实验检测蛋白含量。结果显示PTTG1的表达在SiPTTG1/U87细胞中明显比在Scr/U87细胞中低。提示细胞转染成功。(3)转染小RNA干扰质粒成功之后,分别进行划痕实验,transwell实验和F-actin聚合实验观察PTTG1对U87细胞的影响。transwell实验后固定染色,结果置400倍光镜下观察,随机选取5个视野的细胞数。经过SPSS统计软件分析,实验组穿透Matrivgel基质膜的细胞数(20.00±5.31)明显少于对照组细胞(40±4.48),t=11.1,P=0.000。实验结果有明显的统计学差异。(4)进一步考虑PTTG1影响胶质瘤细胞侵袭力现象的分子机制,我们预测是通过AKT-ARK5通路实现的。所以对Scr/U87细胞和SiPTTG1/U87使用10ng/ml表皮生长因子(EGF)在无血清的培养基中分别刺激0min和5min,分析AKT与ARK5的磷酸化情况。结果显示:在EGF刺激5min后,Scr/U87细胞中Akt,ARK5的磷酸化增强;而SiPTTG1/U87中,经过EGF 5min的刺激,Akt,ARK5磷酸化的水平均没有明显变化。结论:(1)PTTG1在胶质瘤细胞系中高表达并且与胶质瘤细胞的侵袭性显著相关。(2)PTTG1对胶质瘤细胞侵袭性的调控可能是通过Akt-ARK5通路实现的。