鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer, RA)是一种隶属于黄杆菌科、无运动性不形成芽孢的革兰氏阴性菌,可引起鸭、火鸡和其它多种鸟类的败血性感染。该病发病率和死亡率较高,已成为危害各国养鸭业的最为严重的传染病之一。该菌对青霉素、氯霉素、庆大霉素、氟喹酮类药物均敏感,由于各地区分离的菌株不同和对药物的敏感性的差异,加之用药不当导致抗药菌株的出现,使得人们不得不寻找有效的保护性抗原来防控该病。细菌的外膜蛋白是一类具有良好免疫原性的蛋白,但是目前对于鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白的组成和功能却知之甚少。本研究利用二维电泳技术,成功建立了RA1型外膜蛋白蛋白质图谱,通过ESI-MS鉴定了61个蛋白斑点,利用PSORTb在线程序对鉴定出来的蛋白质点进行亚细胞定位分析,其中外膜蛋白27个,占44.26%；周质蛋白有1个,占1.64%；细胞膜蛋白有6个,占9.84%；胞质蛋白有5个,占8.2%；定位不明显的蛋白有22个,占36.07%。其功能涉及生物合成和物质代谢等领域。进一步利用Western blot分析确定了8个与兔高免血清反应性蛋白,这些蛋白在免疫反应中可能起着重要保护作用。以TonB依赖的外膜蛋白受体为研究对象,以RA1基因组DNA为模板,根据获得的TonB依赖的外膜受体蛋白肽片段序列,设计简并引物进行PCR反应获得1216bp的部分编码序列片段。以RA1基因组DNA为模板,利用改良的Sitefinding-PCR方法成功得到了2262bp的全长序列,编码753个氨基酸。以该核苷酸序列编码的氨基酸序列进行BLASTp搜索表明其包含有TonB依赖性外膜受体蛋白的保守结构域,其功能类似大肠杆菌FecA蛋白。首次得到了RA TonB依赖性外膜受体蛋白的基因序列,同时验证了质谱分析结果的可靠性。分别提取了RA1、RA2、RA3、RA4、RA5五个血清型的外膜蛋白,研究外膜蛋白在不同血清型之间的交叉保护作用。结果发现外膜蛋白对同一血清型的保护力能达到100%,而异型之间缺少保护力或者保护力很弱。