目的:采用选择性酶消化法和机械刮除法纯化神经母细胞瘤细胞系,建立起不同浓度的细胞悬液,为下一步的实验做好细胞的准备工作。 方法:无菌条件下,取本院住院手术的神经母细胞瘤病人的新鲜标本,通过消化培养法制备好神经母细胞瘤细胞系,将神经母细胞瘤细胞放入DMEM培养液,补加10%胎牛血清及青、链霉素,置于37℃、5%CO₂、100%湿度的二氧化碳培养箱内培养;通过机械刮除法和选择性酶消化法对细胞进行分离与纯化,采用细胞形态学、NSE免疫组化染色、软琼脂单克隆形成实验对所培养细胞进行检测鉴定。采用酶消化法、Typlan染色法、常规细胞计数法制备荷瘤裸鼠用的细胞悬液。通过生物学方法检测细胞系和细胞悬液。 结果:通过消化培养法建立起神经母细胞瘤细胞系,NB细胞呈小梭形,部分呈泪滴状,少数呈三角形。软琼脂克隆形成实验结果证实所培养细胞为神经母细胞瘤细胞。采用酶消化法、MTT法、Typlan染色法、常规细胞计数法建立起不同浓度的细胞悬液,并绘制细胞生长曲线,为荷瘤鼠的制备做好准备。 结论:本实验应用NB肿瘤病人的新鲜肿瘤组织,采用酶消化法,成功建立神经母细胞瘤细胞系,并用建立的细胞系纯化制备成功细胞悬液。