前言卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,浆液性囊腺癌是其中最常见的卵巢恶性肿瘤,占卵巢恶性肿瘤的40～60%,因此,探索有效的卵巢浆液性囊腺癌诊断及治疗方法有重要意义。整合素是广泛存在于动植物细胞表面的一类细胞黏附分子,是由α和β两个亚单位靠非共价键连接形成的异源双体跨膜糖蛋白。α5β1由α5和β1两个亚单位组成,β亚单位与配体的识别有关,β亚单位则将信号传导至细胞骨架。近年研究显示整合素α5β1与恶性肿瘤的发生、发展也有一定关系,它通过介导肿瘤与基底膜、肿瘤与宿主细胞黏附及信号转导等多个环节,直接或间接地影响肿瘤细胞转移与凋亡、促进肿瘤中血管的生成,从而促进肿瘤细胞的生长和转移。糖基抗原亦表达于细胞膜,是糖类和蛋白质或脂类共价结合形成糖复合物,参与很多细胞功能,包括黏附、识别和信号转导。Lewis y抗原是某些糖蛋白和糖脂的末端寡糖,为双岩藻糖寡糖,是一种Ⅱ型血型相关抗原。Lewis y抗原存在于上皮组织中,包括卵巢、胸腺、肺、胃及结肠等,当这些组织发生癌变时,Lewis y表达明显增高,且增高的患者预后不佳。本研究选取了卵巢浆液性囊腺癌、交界性卵巢浆液性囊腺瘤、卵巢浆液性囊腺瘤以及正常卵巢病例的石蜡标本,应用免疫组织化学染色方法,检测Lewis y抗原、整合素α5及β1的表达情况,探讨Lewis y抗原、整合素α5及β1与卵巢浆液性囊腺癌的相互关系,以期为卵巢浆液性囊腺癌的诊断和治疗提供进一步的实验基础。实验材料与方法一、实验材料选取2006年至2008年中国医科大学附属盛京医院妇产科64例手术切除的卵巢石蜡标本,所有选取病例术前均未经放化疗,病理切片均经HE染色后由病理专家确诊。所有病例分为四组,卵巢浆液性囊腺癌组30例,患者年龄36～73岁,平均年龄55.7岁;交界性卵巢浆液性囊腺瘤组10例,患者年龄22～55岁,平均年龄33.8岁;卵巢浆液性囊腺瘤组13例,患者年龄15～72岁,平均年龄44岁;正常卵巢组11例,患者年龄37～52岁,平均年龄43.6岁。二、实验方法(一)切片预处理及切片病理组织检测切片预处理后,采用免疫组织化学染色方法检测lewis y抗原、整合素α5和整合素β1的表达,免疫组织化学染色具体步骤如下:1、石蜡切片常规二甲苯脱蜡,梯度酒精水化。2、新鲜配制的3%H202孵育10-15分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性,蒸馏水冲洗3次。3、将切片浸人0.01M的EDTA中微波炉抗原热修复。冷却后PBS洗涤3次。4、滴加正常血清封闭液,室温孵育20分钟,倾去血清,5、滴加1:200稀释一抗,4℃过夜。PBS冲洗3次,每次2分钟。6、滴加生物素化二抗,37℃孵育30分钟,PBS冲洗3次,每次2分钟。7、滴加辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素,37℃孵育5分钟,PBS冲洗3次,每次5分钟。8、DAB显色,蒸馏水充分冲洗,苏木素核复染,脱水,透明,封片。阴性对照采用PBS代替第一抗体,其它步骤不变。(二)结果判定细胞膜或细胞浆出现棕黄色或黄色着色判定为阳性。结果观察采用双盲法,由两位病理科医师分别观察所获得的一致意见为最终结果。每张切片随机选取5个高倍视野(×400)根据阳性染色强度和阳性细胞所占百分比进行综合判断。染色程度:不着色记为0分,淡黄色记为1分,棕黄色记为2分,棕褐色记为3分;着色细胞百分数:阴性为0分,1%～10%为1分,11%～25%为2分,26%～50%为3分,＞50%为4分。二项乘积结果0～2为阴性(-),3～4为弱阳性(+),5～8为中度阳性(++),＞9为强阳性(+++)。(三)统计分析应用SPSS 16.0统计软件进行统计分析,各组进行x~2检验,并进行相关性分析。实验结果一、整合素α5在各组的表达情况整合素α5广泛表达于细胞表面及胞浆中,整合素α5在卵巢浆液性囊腺癌组中阳性表达率为86.7%(26/30),其中6例表达(+)、15例表达(++)、5例表达(+++),以中度阳性表达为主;在交界性卵巢浆液性囊腺瘤组中的中度阳性表达率为72.7%(8/11),其中3例表达(+)、4例表达(++)、1例表达(+++),以阳性表达为主;在卵巢浆液性囊腺瘤组中的阳性表达率为69.2%(9/13),其中5例表达(+)、3例表达(++),1例表达(+++),以弱阳性表达为主。在正常卵巢组中的阳性表达率为36.4%(4/11),其中7例表达(-)、3例表达(+)、1例表达(++),以阴性表达为主。可见,整合素α5在卵巢浆液性囊腺癌组中的表达率高于交界性卵巢浆液性囊腺瘤组、卵巢浆液性囊腺瘤组和正常卵巢组(P＜0.05)。二、整合素β1在各组的表达情况整合素β1广泛表达于细胞表面及胞浆中,整合素β1在卵巢浆液性囊腺癌组中阳性表达率为83.3%(22/30),其中7例表达(+)、13例表达(++)、5例表达(+++),以中度阳性表达为主;在交界性卵巢浆液性囊腺瘤组中的阳性表达率为72.7%(8/11),其中5例表达(+)、2例表达(++)、1例表达(+++),以弱阳性表达为主;在卵巢浆液性囊腺瘤组中的阳性表达率为53.8%(7/13),其中5例表达(+)、1例表达(++),1例表达(+++),以弱阳性表达为主。在正常卵巢组中的阳性表达率为36.4%(4/11),其中7例表达(-)、2例表达(+)、2例表达(++),以阴性表达为主。可见,β1在卵巢浆液性囊腺癌组中的表达率高于交界性卵巢浆液性囊腺瘤组、卵巢浆液性囊腺瘤组和正常卵巢组(P＜0.05)。三、Lewis y抗原在各组的表达情况Lewis y抗原阳性表达主要定位于细胞膜和细胞浆内,细胞膜呈浅黄到棕褐色着色,细胞浆亦有黄染。Lewis y抗原在卵巢浆液性囊腺癌组中阳性表达率为90.0%(27/30),其中6例表达(+)、8例表达(++)、13例表达(+++),以强阳性表达为主;在交界性卵巢浆液性囊腺瘤组中的阳性表达率为63.6%(7/11),其中2例表达(+)、4例表达(++)、1例表达(+++),以中度阳性表达为主;在卵巢浆液性囊腺瘤组中的阳性表达率为38.5%(5/13),其中3例表达(+)、2例表达(++),以阴性表达为主。在正常卵巢组中的阳性表达率为0%(0/11),其中11例表达均为阴性。可见,Lewis y抗原在卵巢浆液性囊腺癌组中的表达率明显高于交界性卵巢浆液性囊腺瘤组、卵巢浆液性囊腺瘤组和正常卵巢组(P＜0.01)。四、Lewis y抗原、整合素α5及β1在各组中表达的关系Lewis y抗原在卵巢浆液性囊腺癌、交界性卵巢浆液性囊腺瘤、卵巢浆液性囊腺瘤以及正常卵巢组中的表达逐渐减少,整合素α5及β1在四组中的表达亦呈此趋势。Lewis y抗原与整合素α5间存在着正相关(Spearman相关系数为0.813,P＜0.01),Lewis y抗原与整合素β1间亦存在着正相关(Spearman相关系数为0.837,P＜0.01)。结论Lewis y抗原在正常卵巢组、卵巢浆液性囊腺瘤组、交界性卵巢浆液性囊腺瘤组及卵巢浆液性囊腺癌组中的表达率逐渐增加,整合素α5及β1在四组中的表达亦呈此趋势。Lewis y抗原与整合素α5间表达存在着正相关,Lewis y抗原与整合素β1间表达亦存在着正相关。