【摘 要】
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目的:脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor,BDNF）在大脑中广泛表达。BDNF在调节神经元的神经发生和突触可塑性中起关键作用。在抑郁症患者和动物模型中,海马区BDNF蛋白表达降低,但是Bdnf基因中包含特定外显子的不同转录本在海马区神经元不同部位表达不一,其中外显子Ⅳ表达明显下降,而抗抑郁治疗后恢复。本研究通过构建大鼠Bdnf基因中包含exons
【基金项目】
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山西省自然科学研究面上项目“LncRNAs通过组蛋白修饰调控抑郁模型大鼠海马CA1区Mbdnf/proBDNF表达比率的分子机制（编号:20210302123305）”；
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目的:脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor,BDNF）在大脑中广泛表达。BDNF在调节神经元的神经发生和突触可塑性中起关键作用。在抑郁症患者和动物模型中,海马区BDNF蛋白表达降低,但是Bdnf基因中包含特定外显子的不同转录本在海马区神经元不同部位表达不一,其中外显子Ⅳ表达明显下降,而抗抑郁治疗后恢复。本研究通过构建大鼠Bdnf基因中包含exons4和CDS（Coding sequence）区的转录本过表达慢病毒载体,并检测其在大鼠海马原代神经元中的表达,为深入研究BDNF在抑郁症中的作用提供技术基础。方法:1.以12-21d大鼠海马组织cDNA为模版,利用聚合酶链式反应（PCR）技术扩增Bdnf基因的exons4和CDS序列。基因ID为24225。2.慢病毒过表达载体pcDNA3.1-mCherry经过酶切电泳鉴定成功后,与扩增得到的Bdnf基因的exons4和CDS序列连接,构建pcDNA3.1-exons4-CDS-mCherry慢病毒表达载体。3.重组慢病毒过表达载体pcDNA3.1-exons4-CDS-mCherry经KpnI和EcoRI双酶切鉴定及测序验证成功后,使用三质粒包装系统将重组质粒pcDNA3.1-exons4-CDS-mCheryry和慢病毒辅助包装质粒pMDLg/pRRE、pRSV-Rev和pCMV-VSV-G共转染293T细胞。4.收集并浓缩慢病毒颗粒测滴度。感染大鼠原代海马神经元,荧光显微镜和实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测目的基因在原代海马神经元中的表达。结果:成功构建了 pcDNA3.1-exons4-CDS-mCherry慢病毒过表达载体,转染293T细胞后的表达红色荧光,病毒感染大鼠海马原代神经元后能稳定表达。结论:成功构建了具有特定转录本的Bdnf基因过表达慢病毒载体,为进一步深入研究BDNF在抑郁症中的作用提供技术基础。
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