【摘 要】
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研究目的:牙种植术成功的关键在于种植体和骨之间建立稳定牢固的骨结合,药物可通过改变骨代谢影响这一结合。大量研究已经表明服用β肾上腺素受体（β-AR）阻滞剂的患者种植牙失败率显著降低,这为种植骨结合的成功打下了基础,但阻断β-AR如何调控下游信号分子对种植体与骨结合的作用机制却仍有争议。种植骨结合的建立可通过激发机体自身修复潜能促成,该过程依赖于骨形态生成蛋白2（BMP2）介导的内源性再生。我们采用
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研究目的:牙种植术成功的关键在于种植体和骨之间建立稳定牢固的骨结合,药物可通过改变骨代谢影响这一结合。大量研究已经表明服用β肾上腺素受体（β-AR）阻滞剂的患者种植牙失败率显著降低,这为种植骨结合的成功打下了基础,但阻断β-AR如何调控下游信号分子对种植体与骨结合的作用机制却仍有争议。种植骨结合的建立可通过激发机体自身修复潜能促成,该过程依赖于骨形态生成蛋白2（BMP2）介导的内源性再生。我们采用β-AR阻滞剂普萘洛尔实施细胞和动物实验,利用分子生物、组织形态等技术,旨在探索机体复杂环境下普萘洛尔对种植体骨结合建立的作用影响,并研究普萘洛尔对BMP2介导的种植体与骨结合内源性再生的调控机制,为临床治疗提供新方法和新思路。研究方法:1.体外细胞实验研究普萘洛尔对成骨细胞迁移、增殖、分化的影响:体外提取并培养乳鼠颅骨成骨细胞,第三代用于检测。设置分组为对照组（生理盐水）、低浓度普萘洛尔组（0.1μM）、中浓度普萘洛尔组（1μM）和高浓度普萘洛尔组（10μM）。在培养基中加入50n M异丙肾上腺素模拟交感神经环境,并依次运用细胞划痕试验、EDU法、茜素红染色法及钙含量测定检测成骨细胞迁移能力、增殖能力以及成骨分化能力;免疫荧光检测BMP2等基因表达水平。2.体外细胞实验研究普萘洛尔通过c AMP/PKA信号通路调控BMP2表达进而促进骨再生:设置分组为对照组（生理盐水）与低浓度普萘洛尔组（0.1μM）,ELISA法检测两组c AMP和PKA表达水平;设置对照组（生理盐水）与高浓度普萘洛尔组（10μM）,加入PKA抑制剂H89干预,Western Blot、QPCR法检测BMP2等成骨标志物基因表达水平。3.动物模型验证普萘洛尔对BMP2介导的种植体骨结合的促进作用:构建家兔胫骨种植体模型,设置分组为对照组（生理盐水）、低浓度普萘洛尔组（0.1mg/kg）、中浓度普萘洛尔组（1mg/kg）和高浓度普萘洛尔组（10mg/kg）,于家兔手术部位皮下注射相应药物,连续注射6w后,处死动物并分离包含种植体的胫骨组织用于硬组织切片组织形态学分析;同时对BMP2等成骨基因与蛋白表达水平进行检测。研究结果:1.细胞划痕实验检测结果显示,普萘洛尔组划痕宽度均大于对照组（P<0.05）;Edu法检测结果显示,普萘洛尔组的Edu细胞阳性率均远高于对照组（P<0.01）;茜素红染色法检测到普萘洛尔干预下存在更丰富的实质性钙染色结节,钙含量测定显示普萘洛尔组的钙含量高于对照组（P<0.05）;免疫荧光检测发现普萘洛尔组BMP2等基因表达较对照组显著提高（P<0.05）。2.ELISA检测显示低浓度普萘洛尔组c AMP、PKA表达水平较对照组显著升高（P<0.05）。在加入PKA抑制剂H89后,QPCR检测显示BMP2等成骨基因表达均显著降低（P<0.05）。3.硬组织切片酸性品红-亚甲基蓝染色显示,普萘洛尔组较对照组有更显著的新生成骨细胞、骨小梁以及更多的与种植体直接接触的新生骨,较对照组种植体骨结合率（BIC）更高（P<0.05）。Western Blot与QPCR检测显示普萘洛尔组较对照组BMP2等成骨蛋白与基因表达均显著增强（P<0.05）。研究结论:本实验通过体外及体内研究,证实了普萘洛尔通过激活c AMP/PKA通路,上调BMP2信号,进而诱导靶细胞归巢分化,促进了种植体骨结合的内源性再生。为临床治疗带来新的思路和方法。
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