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研究背景和目的:以树突状细胞(dendritic cell,DC)为基础的抗肿瘤免疫疗法已成为研究热点。肿瘤组织表达多种胚胎期抗原,与胚胎干细胞之间存在共同的抗原或细胞表面分子。本研究通过制备胚胎干细胞抗原且用其致敏树突状细胞制备DC疫苗,旨在观察负载胚胎干细胞抗原的DC疫苗在小鼠肝癌皮下移植瘤模型中的抗肿瘤免疫治疗作用。研究方法:1.通过联合rm GM-CSF、rm IL-4,培养C57BL/6J小鼠骨髓来源的DC,胚胎干细胞抗原或肝癌细胞抗原诱导其成熟,制成DC疫苗;流式细胞术分析胚胎干细胞抗原致敏的DC疫苗、肝癌细胞抗原致敏的DC疫苗表面分子CD11c、CD80、CD86表达情况;2.小鼠肝癌细胞株(Hepa1-6)4×10^6/只接种于小鼠腹部皮下,建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型。根据不同抗原致敏的DC疫苗,设ESC-DC疫苗组、Hepa1-6-DC疫苗组、DC疫苗组和对照组(PBS组),每组10只小鼠,每周1次接种疫苗(2×10^6/只)或PBS(0.1ml/只),共3个治疗周期。每5天观察并记录各组小鼠皮下肿瘤的横径、长径,在任意肿瘤直径≥15mm,或开始出现肿瘤溃疡时处死所有小鼠,称量并比较各组肿瘤的质量。在治疗结束后5天ELISA法检测小鼠外周血清Ig G含量;LDH法检测小鼠脾脏淋巴细胞对Hepa1-6的细胞毒性杀伤能力;流式细胞术检测小鼠脾脏淋巴细胞中CD4+CD25+Fox P3+T细胞含量。结果:1.成功培养小鼠骨髓来源的DC,经流式表型检测,DC表面分子CD11c约占78%,ESC-DC表面分子CD80、CD86表达率(53.81%±4.48%、52.63%±5.83%)高于Hepa1-6-DC(46.57%±5.93%、42.88%±3.90%)、DC(35.04%±9.91%、34.67%±5.10%),p<0.05;2.动态监测各治疗组和对照组小鼠皮下肿瘤的生长情况,结果显示:肿瘤平均生长速度ESC-DC组<Hepa1-6-DC组<DC组<PBS组;选择完成治疗周期后21天处死小鼠,称重并比较各组肿瘤的平均质量,ESC-DC组肿瘤重量低于Hepa1-6-DC组、DC组、PBS组,p<0.05,分别为0.1573克、0.2387克、0.2620克、0.3633克;3.于治疗结束后5天,对荷瘤小鼠进行免疫学指标检测,结果显示:ESC-DC组外周血Ig G分泌水平高于Hepa1-6-DC组、DC组、PBS组,差异有统计学意义,分别为77.99±6.43ng/ml、49.47±4.36ng/ml、40.61±5.17ng/ml、17.21±2.55ng/ml;ESC-DC组荷瘤小鼠脾脏淋巴细胞对Hepa1-6的细胞毒杀能力高于Hepa1-6-DC组、DC组、PBS组,在不同的效靶比例中差异均有统计学意义;流式检测脾脏CD4+CD25+Fox P3+T细胞占CD4+T细胞的比例,结果显示:ESC-DC组(5.94%±0.98%)明显低于Hepa1-6-DC组(8.39%±0.60%)、DC组(10.65%±1.06%)、PBS组(13.27%±0.96%),p<0.05。结论:1.胚胎干细胞抗原在体外能有效刺激小鼠骨髓来源的DC成熟,效果优于肝癌细胞(Hepa1-6)抗原;2.ESC-DC疫苗、Hepa1-6-DC疫苗能够诱导荷瘤小鼠产生抗肿瘤免疫反应,减缓肝癌小鼠皮下移植瘤的生长速度;3.ESC-DC疫苗对肝癌小鼠的抗肿瘤免疫保护作用优于Hepa1-6-DC疫苗及未经抗原致敏的DC疫苗,为ES C-DC疫苗的临床应用提供理论和实验基础。