【摘 要】
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该论文构建了德国镜鲤基因组DNA文库,并利用DNA文库对德国镜鲤胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因进行了筛选与鉴定.取镜鲤肝组织5克,提取基因组DNA.取少量基因组DNA利用限制性
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该论文构建了德国镜鲤基因组DNA文库,并利用DNA文库对德国镜鲤胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因进行了筛选与鉴定.取镜鲤肝组织5克,提取基因组DNA.取少量基因组DNA利用限制性内切酶Sau3AⅠ进行酶消化预试验,确定得到9-23kb消化产物的最佳酶量和反应时间.用SM对基因组文库进行适当稀释,与新鲜制备的宿主菌LE392混合培养,制备噬菌体平板.将噬菌体DNA转移至硝酸纤维滤膜上.利用已知的鲤鱼胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)cDNA设计探针,用<32>P标记IGF-Ⅱ探针,在硝酸纤维滤膜上进行杂交,洗膜2次,放射自显影.挑取阳性克隆,与宿主菌混合培养,进行第二轮噬菌斑原位杂交,对阳性克隆进行纯化.提取阳性克隆噬菌体DNA.以鲤鱼IGF-Ⅱ cDNA设计一对PCR引物,且正向引物与IGF-Ⅱ探针核苷酸序列相同,以阳性克隆噬菌体DNA为模板进行PCR反应检测,电泳结果显示为一条500bp左右的带,与引物设计基本吻合.
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