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内生菌作为生态系统的重要组成之一,在长期的系统演化过程中,与宿主形成了高度协同进化关系,具有重要的理论研究和应用价值。目前,有关小白杏内生细菌的研究较为有限,且对其与果实腐败变质的关系知之甚少。本文以采后库车小白杏为研究对象,采用BiologEco微孔板法结合高通量测序技术对其内生细菌群落组成和演替规律进行了分析。同时,采用传统分离法和非培养法结合16SrRNA基因序列分子鉴定,对库车小白杏采后内生细菌进行分离、鉴定,并对所得菌株的功能酶产生能力、抑菌能力进行了分析。此外,对小白杏中的潜在软腐病原细菌进行了筛选和验证,进而利用常用细菌抗生素对软腐病原细菌的抑制效果进行了测定。主要研究结果如下:
(1)采后不同成熟度的库车小白杏内生细菌群落代谢活性和碳源利用类型存在明显不同。完熟期内生细菌群落代谢活性、可利用碳源的数量均高于青熟期。且随着成熟度的增加,主要菌群由利用碳水化合物类、酚酸类和胺类演替为利用氨基酸类、羧酸类、多聚物类内生细菌。
(2)不同引物条件下,检测到小白杏内生细菌的数量和组成存在显著差异。采用515F和806R引物获得了47个OTUs;主要由蟑螂杆状体科未分类属(Unidentified Blattabacteriaceae)、普氏菌属(Prevotella)、葡糖杆菌属(Gluconobacter)、泛菌属(Pantoea)组成。采用799F和1193R获得了352个OTUs;主要由类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、短波单胞菌属(Brevundimonas)、蟑螂杆状体科未分类属UnidentifiedBlattabacteriaceae)、假单胞菌属(Pseudomonas)、泛菌属(Pantoea)组成。2种引物检测到30个相同OTUs,约占总体的4.9%。
(3)试验获得了一批蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、果胶酶产生菌和病原拮抗菌。其中,具有淀粉酶活性的占绝大多数,其次为产果胶酶、蛋白酶、纤维素酶、脂肪酶类代表菌。且59株具有2种或2种以上的功能酶产生能力。
(4)试验证明了葡糖杆菌属(XAAS-XY2)是库车小白杏采后软腐的主要病原细菌。其对完熟期的致腐能力最强,接种96h时,致腐率达100%;对青熟期的致腐能力最弱。且与自然对照组相比,接种组小白杏提前2天出现了明显的软腐现象,致腐率高达100%。此外,研究发现,卡那霉素、四环素、妥布霉素、阿米卡星、链霉素、利福平、庆大霉素、诺氟沙星对XAAS-XY2具有较强的抑制效果。
综上所述,随着库车小白杏采后成熟度的增加,其内生细菌群落结构存在着明显的更替,主要菌群由蟑螂杆状体科未分类属演替为葡糖杆菌属、泛菌属类微生物,并加快了库车小白杏的软腐变质。
(1)采后不同成熟度的库车小白杏内生细菌群落代谢活性和碳源利用类型存在明显不同。完熟期内生细菌群落代谢活性、可利用碳源的数量均高于青熟期。且随着成熟度的增加,主要菌群由利用碳水化合物类、酚酸类和胺类演替为利用氨基酸类、羧酸类、多聚物类内生细菌。
(2)不同引物条件下,检测到小白杏内生细菌的数量和组成存在显著差异。采用515F和806R引物获得了47个OTUs;主要由蟑螂杆状体科未分类属(Unidentified Blattabacteriaceae)、普氏菌属(Prevotella)、葡糖杆菌属(Gluconobacter)、泛菌属(Pantoea)组成。采用799F和1193R获得了352个OTUs;主要由类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、短波单胞菌属(Brevundimonas)、蟑螂杆状体科未分类属UnidentifiedBlattabacteriaceae)、假单胞菌属(Pseudomonas)、泛菌属(Pantoea)组成。2种引物检测到30个相同OTUs,约占总体的4.9%。
(3)试验获得了一批蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、果胶酶产生菌和病原拮抗菌。其中,具有淀粉酶活性的占绝大多数,其次为产果胶酶、蛋白酶、纤维素酶、脂肪酶类代表菌。且59株具有2种或2种以上的功能酶产生能力。
(4)试验证明了葡糖杆菌属(XAAS-XY2)是库车小白杏采后软腐的主要病原细菌。其对完熟期的致腐能力最强,接种96h时,致腐率达100%;对青熟期的致腐能力最弱。且与自然对照组相比,接种组小白杏提前2天出现了明显的软腐现象,致腐率高达100%。此外,研究发现,卡那霉素、四环素、妥布霉素、阿米卡星、链霉素、利福平、庆大霉素、诺氟沙星对XAAS-XY2具有较强的抑制效果。
综上所述,随着库车小白杏采后成熟度的增加,其内生细菌群落结构存在着明显的更替,主要菌群由蟑螂杆状体科未分类属演替为葡糖杆菌属、泛菌属类微生物,并加快了库车小白杏的软腐变质。