背景:成年哺乳动物脊髓损伤(Spinal cord injury, SCI)后的修复十分困难,我们曾应用多种神经组织移植修复成鼠脊髓损伤,效果均不理想。神经干细胞(Neural stem cells, NSCs)因其分布的广泛性及多分化潜能,被视为中枢神经系统替代治疗的理想材料。但单纯NSCs移植后很快弥散流失或形成细胞团,出现营养缺乏和代谢障碍,不能形成功能性的修复。利用组织工程技术构建神经干细胞/支架复合物可以克服这些缺点,为细胞附着提供锚靠点,以利于其生长、分化和代谢。但急性SCI的微环境会抑制NSCs向神经元分化,甚至对其存活都会有负面影响,NSCs主要分化成星形胶质细胞而非神经元,神经干细胞/支架复合物作为修复材料的潜能受到巨大挑战。如何改善局部环境,如何诱导神经干细胞更多地向神经元表型分化,是脊髓组织工程研究中亟待解决的问题。处在发育期的胚胎脊髓(Fetal spinal cord, FSC)允许自身神经干细胞大量增殖及向神经元表型分化。同时,FSC中存在高浓度的NT-3和BDNF等神经营养因子,具有诱导神经干细胞向神经元方向分化的能力,并可提供其他有益的蛋白质成分、神经化学因子或细胞外基质,起到调控和协同作用,使脊髓固有的各种细胞成份最终达到合适的比例。鉴于上述,本实验将NSCs接种在PGA支架上,再提供胚胎脊髓提取液(Fetal spinal cord extracts, FE)模拟NSCs发育的胚胎性微环境,提供生长分化所需的神经化学因子或细胞外基质,促进向神经元表型分化,体外构建了一种包含神经元和胶质细胞等成份、具有一定组织形态和功能的复合神经组织,我们暂将其命名为组织工程化脊髓(Tissue-engineered spinal cord, TSC)。如此,修复急性SCI时通过移植这种在体外己完成分化形成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的组织,就有可能避免体内的复杂环境对干细胞分化的不确定性影响,提高修复成年鼠脊髓损伤的效果。目的:利用组织工程技术,研究和开发能修复成年鼠损伤脊髓的组织工程材料,为脊髓损伤的治疗提供新思路、新方法。方法:1.胚胎脊髓神经干细胞的分离培养与鉴定。分离和克隆扩增孕14天SD大