背景和目的近年来,消化系统恶性肿瘤的发病率和死亡率呈逐年上升的趋势,并且部分肿瘤如胃癌、肝癌、胰腺癌等的预后较差,已成为严重威胁人类生命和健康的重大疾病之一。目前临床上常用的血清标志物敏感性或特异性均不够理想,不能实现对某一种肿瘤的早期准确诊断。因此寻找提高消化道肿瘤早期诊断率的高效特异性生物标志物不仅具有重要的临床意义,而且势在必行。目前的研究显示,在慢性炎症性疾病如肝炎、肝硬化等发生恶性转化的过程中,机体可产生针对自身肿瘤相关抗原的抗体,并且一些自身抗体在发生恶性转化前就可在患者血清中检测到,这为恶性肿瘤的早期诊断提供了新的思路。铁蛋白轻链(ferritin light polypeptide, FTL)是铁蛋白的一种亚基,主要参与机体细胞内铁的储藏与转运。研究显示,铁蛋白在多种恶性肿瘤患者血清中的含量显著高于正常人血清中的含量,提示铁蛋白可能是一种血清肿瘤标志物。本课题组前期已成功构建好含有目的基因的测序正确的重组子pET30a-FTL。本研究将重组子转化到大肠杆菌BL21中,通过原核表达的方法获得FTL重组蛋白,并用其作为肿瘤相关抗原检测原发性肝癌患者、慢性肝病患者、食管癌患者、胃癌患者及正常人血清内抗FTL抗体的水平,评价其作为消化系统癌症诊断指标的价值,为进一步联合其他肿瘤相关抗原诊断某一消化系统恶性肿瘤的研究奠定基础。方法1.将含有目的基因的重组表达质粒转化到表达宿主菌大肠杆菌BL21中。2.确定最佳诱导条件：确定IPTG诱导目的蛋白最佳表达浓度和最佳表达时间。3.大量诱导表达：诱导的菌体经超声破碎后进行可溶性分析确定FTL重组蛋白的表达形式,并尽可能优化诱导条件增加可溶性蛋白的表达量。4.蛋白纯化：通过镍离子亲和层析法纯化带有组氨酸标签的重组蛋白,测定纯化蛋白的浓度,并用Western blot鉴定重组蛋白。5.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测正常人、慢性肝炎及常见消化道癌症(原发性肝癌、食管癌、胃癌)患者血清中的FTL抗体含量,比较其在正常人、慢性肝炎及常见消化道癌症(原发性肝癌、食管癌、胃癌)患者血清中的水平。6.以正常人血清中FTL抗体含量的百分位数P95作为截断值,计算消化系统各种癌症组、慢性肝病组和正常组FTL抗体阳性率,并使用筛检试验的评价方法来评价FTL检测消化系统癌症的诊断价值。结果成功转化了重组表达质粒,寻找到目的蛋白大量表达的最佳诱导条件为0.05mmol/L IPTG诱导5h；目的蛋白主要以不溶性的包涵体形式存在；通过镍离子亲和层析法获得到纯化蛋白,并通过Western blot确定了纯化的重组蛋白的免疫学活性。ELISA结果显示,消化系统癌症患者血清中的FTL抗体水平高于慢性肝病患者和正常人血清中的FTL抗体水平；FTL检测原发性肝癌、食管癌、胃癌患者的灵敏度分别为17.6%、14.0%、12.0%,而在正常人及慢性肝病组中的灵敏度仅为5.1%、9.8%,这说明单独使用FTL抗体作为检测消化道癌症的标志物有(?)定的临床诊断价值,但诊断价值较低。结论1.成功构建了FTL原核表达系统和蛋白纯化系统,并获得纯化的FTL重组蛋白；2.FTL抗体在消化系统癌症患者血清中含量增加,是消化系统癌症的一种血清标志物,单独检测时特异度高达94.9%,但灵敏度低。