【摘 要】
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该研究的目的是探讨NDV F基因DNA疫苗与鸡IL-18基因联合免疫鸡体的效果及意义.NDV北京株(FE)F基因扩增、克隆与序列分析.参考GenBank中已发表的NDV F基因序列,设计、合成一对
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该研究的目的是探讨NDV F基因DNA疫苗与鸡IL-18基因联合免疫鸡体的效果及意义.NDV北京株(F<,48>E<,9>)F基因扩增、克隆与序列分析.参考GenBank中已发表的NDV F基因序列,设计、合成一对含有BamHI和HindⅢ酶切位点以及ATG起始密码子的引物,通过RT-PCR扩增出NDV北京株(F<,48>E<,9>)的F基因,克隆到pGEM-T Easy载体中.经PCR鉴定和酶切鉴定的阳性重组质粒pGEM-F,经序列测定并与GenBank中NDV F基因进行序列比较和分析.F基因真核表达质粒pcDNA-F的构建与瞬时表达.将F片段克隆到真核表达载体pcDNA-3.1中,得到重组质粒pcDNA-F.pcDNA-F在脂质体介导下转染Vero细胞,通过间接免疫荧光试验检测,结果表明F基因在Vero细胞中成功进行了瞬时表达.pcDNA-F与pcDNA-cIL-18联合免疫试验.将14d龄鸡随机分为4组,每组10只.第Ⅰ组:pcDNA-F+pcDNA-cIL-18免疫组;第Ⅱ组:pcDNA-F免疫组;第Ⅲ组:传统疫苗免疫组;第Ⅳ组:非免疫对照组.分别于14d龄、28d龄进行一免和二免.分别于14、21、28、35、42d龄,心脏采血,分离血清及淋巴细胞.分别用ELISA检测测定其抗体水平,以淋巴细胞转化试验(MTT)方法检测T细胞转化水平.并于43d龄用50LD<,50>的NDV强毒株进行攻毒保护试验.该试验综合表明将真核表达质粒pcDNA-F接种小鸡,可诱导细胞免疫和体液免疫应答,对致死量F<,48>E<,9>强毒攻击可提供3/10免疫保护.pcDNA-IL18与pcDNA-F联合免疫小鸡,机体细胞免疫应答明显增强,免疫保护效果比pcDNA-F免疫也有提高.再一次证实了鸡IL-18的免疫增强作用,尽管其免疫保护效果未能达到常规疫苗的效果,但提示具有深入研究、提高的诱人前景.
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