论文Ⅰ Setanaxib（GKT137831）在治疗阿霉素引起的心脏毒性中的作用及机制研究研究背景随着肿瘤治疗方法（包括化疗、放疗和免疫治疗等）的不断发展,肿瘤患者的预后和生存率有了显著改善。然而,在一些存活的肿瘤患者中,心血管疾病却成为患者死亡的主要原因,这可能是因为心血管疾病和肿瘤有许多共同的危险因素和病理生理机制,患者可能会同时患上这两种疾病,而另一方面,肿瘤治疗引起的心血管损伤可能会使这些存活患者面临更高的心血管疾病风险。因此,肿瘤治疗与心血管疾病进入交汇时代,肿瘤心脏病学这一新兴交叉学科应运而生。而肿瘤治疗相关的心功能不全（CTRCD）是肿瘤治疗中最令人担忧的心血管并发症,会导致死亡率的增加。阿霉素（DOX）是一种高效、广谱、经典的蒽环类药物,可用于治疗乳腺癌、卵巢癌和胃肠道恶性肿瘤等实体肿瘤和血液系统恶性肿瘤（如淋巴瘤和白血病）,但是DOX会导致严重的心肌病和充血性心力衰竭,因此限制了其在临床上的应用。DOX引起心脏毒性的机制尚不明确,目前研究表明其机制可能是多因素的,包括活性氧（ROS）生成增多和影响拓扑异构酶2β的直接途径,以及其他间接途径。NADPH氧化酶（NOX）是一种多组分酶复合物,是真核细胞中ROS的主要来源,其产生的ROS参与机体许多重要的生理过程,是信号转导通路的关键调节因子。NOX与DOX引起的心肌细胞凋亡有关。例如,gp91phox敲除或NOX2敲除小鼠可以抵抗DOX引起的心脏毒性;NOX2敲除明显减轻了 DOX引起的小鼠心肌萎缩、心肌细胞凋亡、纤维化、白细胞浸润和心功能不全等;心肌细胞Rac1基因缺失及Rac1抑制剂NSC23766对DOX引起的心脏毒性也具有保护作用。因此,靶向NOX可能是减轻DOX引起的心脏毒性的有效方法。Setanaxib（GKT137831）是一种特异性的双重NOX1和NOX4抑制剂。最近的研究表明,GKT137831对许多心血管疾病的发生发展具有保护作用。例如,GKT137831延缓了糖尿病相关动脉粥样硬化的发展,并减轻了高血压引起的心肌肥大和重塑。然而,未有研究报道GKT137831是否在DOX引起的心脏毒性中具有保护作用。因此在这项研究中,我们研究了 GKT137831治疗在改善DOX引起的心脏毒性中的作用及其潜在的作用机制。研究目的1.探讨GKT137831治疗能否改善DOX引起的心脏毒性。2.探讨GKT137831治疗改善DOX引起的心脏毒性的潜在机制。研究方法1.DOX心脏毒性动物模型的构建及干预60只8周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为4组:对照组（10只）、对照+GKT137831组（10只）、DOX组（20只）和DOX+GKT137831组（20只）。为了构建DOX心脏毒性的动物模型,给予DOX组和DOX+GKT137831组小鼠腹腔注射DOX（5 mg/kg）,累积剂量为20 mg/kg。在第一次注射DOX后,通过灌胃的方法给予对照+GKT137831组和 DOX+GKT137831 组的小鼠 GKT137831（60mg/kg/d）治疗 6 周。2.心脏超声实验末,对小鼠进行经胸超声心动图检查,收集的参数包括左心室射血分数（LVEF）、短轴缩短率（FS%）、收缩末期室间隔厚度（IVSS）、舒张末期室间隔厚度（IVSD）、左心室收缩末期内径（LVESD）、左心室舒张末期内径（LVEDD）、左心室收缩末期后壁厚度（LVPWS）和左心室舒张末期后壁厚度（LVPWD）。以上测量均选用5个连续心动周期,并取5次测量结果的平均值。3.组织取材GKT137831灌胃6周后,给予小鼠安乐死并取材。留取小鼠血清,离心后冻存于-80℃冰箱。对于心脏组织,一部分组织放入液氮速冻后,转存-80℃冰箱以长期保存;另一部分心脏组织直接制备新鲜组织冰冻切片或置于4%多聚甲醛固定,以备后续组织病理学检查。4.组织病理学检测心脏组织标本固定后行石蜡包埋,制备石蜡组织切片。对小鼠心肌组织切片进行HE染色,观察形态学改变;进行Masson染色,观察纤维化情况;进行免疫荧光染色,评估NOX1和NOX4的蛋白表达含量;通过透射电镜（TEM）检测,观察线粒体的形态学改变;进行组织TUNEL染色,评估凋亡情况;取材后制备的新鲜组织冰冻切片进行DHE染色,评估ROS的水平。5.血清学检测实验末,收集小鼠血清,分别测定氨基末端B型利钠肽前体（NT-proBNP）、肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）、丙二醛（MDA）的含量。6.新生大鼠心肌细胞（NRCM）的提取及处理提取NRCM并将其种植于合适的细胞培养板中。种板后24小时,将培养基换成高糖DMEM、1.6%马血清、1%新生牛血清、青霉素（100 U/ml）、链霉素（100mg/ml）和100μmol/LBRDU后再培养48小时。在种板后的第四天,开始实验。在一些实验中,用不同浓度的DOX刺激NRCM 24个小时或分别用GKT137831（5μmol/L）预处理NRCM 1 个小时,NAC（10mmol/L）预处理 NRCM 1 个小时,SP600125（JNK 抑制剂,10μmol/L）预处理NRCM 1个小时,PD98059（ERK抑制剂,10μmol/L）预处理NRCM 1个小时,SB203580（p38 MAPK抑制剂,10μmol/L）预处理NRCM 1个小时,然后再与DOX（2μmol/L）共孵育24个小时。7.细胞乳酸脱氢酶（LDH）检测用LDH检测试剂盒测定NRCM LDH的水平。8.细胞ROS检测用ROS检测试剂盒测定NRCM ROS的水平。9.线粒体膜电位（ΔΨm）检测用ΔΨm检测试剂盒测定NRCM ΔΨm的水平。10.细胞TUNEL检测用TUNEL检测试剂盒检测NRCM凋亡水平。11.分子学检测在体内和体外实验中,采用Western Blot技术检测蛋白的表达。12.统计分析数据研究结果1.GKT137831治疗减轻了 DOX引起的心肌损伤（1）GKT137831治疗6周后,Kaplan-Meier生存曲线分析显示,与对照组小鼠相比,DOX组小鼠的生存率显著下降（p＜0.05）;而与DOX组小鼠相比,GKT137831治疗提高了小鼠的生存率,但无显著差异（p＞0.05）。（2）GKT137831治疗6周后,与对照组小鼠相比,DOX组小鼠血清中NT-proBNP（p＜0.001）和cTnⅠ（p＜0.001）的含量显著升高;而与DOX组小鼠相比,GKT137831治疗显著降低了小鼠血清中NT-proBNP（p＜0.01）和cTnⅠ（p＜0.01）的含量。2.GKT137831治疗改善了 DOX引起的心功能降低（1）与对照组小鼠相比,DOX 组小鼠的 LVEF（p＜0.001）、FS%（p＜0.001）、IVSS（p＜0.01）、IVSD（p＜0.01）、LVPWS（p＜0.001）和 LVPWD（p＜0.01）显著降低,LVESD（p＜0.001）显著增加;LVEDD虽有增加但无显著差异（p＞0.05）。（2）GKT137831治疗6周后,GKT137831对DOX所致的左室扩张和LVEF（p＜0.01）、FS%（p＜0.05）的降低有显著的改善作用。3.GKT137831治疗改善了 DOX引起的NRCM活力的降低（1）在体外实验中,DOX刺激以剂量依赖性的方式引起LDH释放增加,提示细胞活力的降低。（2）当用GKT137831预处理NRCM 1个小时后,再与DOX共孵育24个小时,LDH的释放减少,提示GKT137831的干预可以改善DOX引起的NRCM活力的降低。4.DOX刺激增加了心肌中NOX1和NOX4的蛋白表达水平（1）在体内实验中,Western blot结果显示,与对照组小鼠相比,DOX组小鼠心肌中NOX1和NOX4的蛋白表达显著升高（p＜0.01）。免疫荧光染色的结果也证实了这一结果。（2）在体外实验中,随着DOX刺激浓度的增加和DOX刺激时间的延长,NRCM中NOX1和NOX4的蛋白表达呈剂量依赖性和时间依赖性升高。5.GKT137831治疗降低了 DOX引起的心肌过度的氧化应激（1）在体内实验中,Western blot结果显示,与DOX组小鼠相比,GKT137831治疗后小鼠心肌中NOX1（p＜0.05）和NOX4（p＜0.01）的蛋白表达水平显著降低。在体外实验中,Western blot结果显示,GKT137831的干预显著降低了 DOX引起的NRCM中NOX1（p＜0.05）和NOX4（p＜0.05）蛋白表达水平的升高。（2）在体内实验中,与对照组小鼠相比,Western blot检测DOX组小鼠心肌中4-HNE的蛋白表达显著增加（p＜0.001）,而GKT137831治疗显著降低了 DOX引起的4-HNE蛋白表达的升高（p＜0.01）;与对照组小鼠相比,DOX组小鼠血清中MDA的含量显著升高（p＜0.001）,而GKT137831治疗显著降低了 DOX引起的血清中MDA含量的升高（p＜0.01）;与对照组小鼠相比,DOX组小鼠心肌中的DHE荧光强度显著增强（p＜0.001）,而GKT137831治疗显著降低了 DHE荧光强度（p＜0.01）。（3）在体外实验中,通过DCFH-DA的绿色荧光强度来衡量ROS的水平,提示GKT137831干预显著降低了 DOX引起的ROS的产生（p＜0.05）。6.GKT137831治疗改善了 DOX引起的心肌线粒体损伤（1）在体内实验中,透射电子显微镜观察发现,与对照组小鼠心肌线粒体相比,DOX组小鼠心肌线粒体发生了排列不规则、肿胀、空泡化和线粒体嵴破裂等异常改变,而GKT137831治疗后改善了这些异常。（2）在体外实验中,JC-1染色显示,GKT137831干预可部分恢复由DOX引起的ΔΨm的降低。7.GKT137831治疗减轻了 DOX引起的心肌细胞凋亡（1）在体内实验中,与对照组小鼠相比,DOX组小鼠心肌中TUNEL阳性细胞的比例显著增加（p＜0.001）,而GKT137831治疗后,TUNEL阳性细胞的比例显著降低（p＜0.001）。（2）Western blot结果显示,与对照组小鼠相比,DOX组小鼠的凋亡指标cleaved PARP（c-PARP）（p＜0.001）、Bax（p＜0.001）和 cleaved caspase3（CC3）（p＜0.01）的表达水平显著增加,抗凋亡指标Bcl-2的表达水平显著降低（p＜0.001）,而GKT137831 治疗后,c-PARP（p＜0.05）、Bax（p＜0.01）和 CC3（p＜0.05）的表达水平显著降低,Bcl-2的表达水平显著升高（p＜0.01）。8.GKT137831治疗减轻了 DOX引起的NRCM细胞凋亡（1）在体外实验中,Western blot结果显示,与对照组相比,DOX组的凋亡指标c-PARP（p＜0.0.01）、Bax（p＜0.001）和CC3（p＜0.01）的表达水平显著增加,抗凋亡指标Bcl-2的表达水平显著降低（p＜0.001）,而GKT137831干预后,c-PARP（p＜0.05）、Bax（p＜0.01）和CC3（p＜0.05）的表达水平显著降低,Bcl-2的表达水平显著升高（p＜0.05）。（2）TUNEL染色显示,GKT137831干预显著降低了 TUNEL阳性细胞的百分比（p＜0.001）。9.GKT137831通过抑制MAPK通路减轻了 DOX引起的细胞凋亡（1）DOX以时间依赖性的方式促进JNK、ERK和p38 MAPK的磷酸化和激活。（2）使用 SP600125（JNK 抑制剂）、PD98059（ERK 抑制剂）和 SB203580（p38 MAPK抑制剂）预处理NRCM 1个小时后,再与DOX共孵育NRCM 24个小时,Western blot结果显示,凋亡指标c-PARP和CC3的蛋白表达水平显著降低。TUNEL染色显示,SP600125、PD98059和SB203580预处理也显著降低了 TUNEL阳性细胞的百分比。（3）使用GKT137831 预处理NRCM 1个小时后,再与DOX共孵育NRCM 24个小时,提取细胞蛋白进行了 Western blot检测,结果显示,GKT137831干预使JNK、ERK和p38 MAPK的磷酸化程度降低。研究结论1.GKT137831治疗减轻了 DOX引起的心肌损伤,改善了心脏功能。2.GKT137831治疗降低了 DOX引起的心肌过度的氧化应激、心肌线粒体损伤及细胞凋亡。3.GKT137831通过抑制MAPK通路减轻了 DOX引起的细胞凋亡。论文Ⅱ 恩格列净在治疗射血分数保留的心力衰竭中的作用及机制研究研究背景射血分数保留的心力衰竭（HFpEF）的发病率约占心力衰竭（HF）的50%以上。随着人口老龄化和高血压、糖尿病、肥胖等代谢性疾病发生率的增加,HFpEF的发病率和患病率也呈上升趋势。HFpEF患者的再住院率高,生活质量差,而且HFpEF患者疾病负担沉重,预后差,5年内死亡率也高达10%-30%。因此HFpEF已成为一个严重的公共卫生问题。目前,大多数获批用于治疗射血分数降低的心力衰竭（HFrEF）的药物,并没有明显改善HFpEF患者的死亡率,这在很大程度上与HFpEF疾病本身的复杂性和异质性有关。因此,为了提高对HFpEF发病机制和治疗的认识,并更好地研究炎症、大血管和微血管功能障碍、纤维化和组织重塑在HFpEF疾病进展中的具体作用和机制,构建良好的HFpEF实验动物模型就显得尤为重要。同时,由于缺乏能够充分反映人类HFpEF复杂情况的动物模型,也使得HFpEF治疗方法的研发受到了限制。恩格列净（EMPA）是一种钠葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂（SGLT2i）,它可以通过抑制近端肾小管S1段的钠葡萄糖协同转运蛋白2（SGLT2）对葡萄糖的重吸收,从而降低血糖水平。越来越多的临床研究证实,SGLT2i可以明显降低患者因HF的住院率,而且其在降低患者因HF住院率的临床获益与患者是否合并糖尿病无关。即使是对目前为止还没有特别有效治疗药物的HFpEF,SGLT2i也显示出了一些让人欣慰的结果。从EMPA成为第一种可以显著改善HFpEF患者临床结局的药物,到达格列净（DAPA）可以在全射血分数谱上同时降低了心血管死亡风险、全因死亡风险和主要不良心血管事件（MACE）,SGLT2i在HF中临床获益的具体机制值得我们进行更多的基础研究,特别是在HFpEF领域。在本研究中,我们在一种复合因素干预构建的HFpEF小鼠模型的基础上,探讨了EMPA在HFpEF治疗中作用及其潜在机制,以期能为HFpEF的治疗提供新的思路。研究目的探讨恩格列净在治疗射血分数保留的心力衰竭中的作用及机制。研究方法1.HFpEF动物模型的构建及干预60只8周龄雄性C57BL/6N小鼠,适应性喂养1周后随机分为2组:对照组（n=20）和HFpEF模型组（n=40）,采用高脂饮食（HFD）+L-NAME（饮用水中0.5g/L）的方法建立HFpEF模型。HFD+L-NAME联合喂养建模5周后,再将2组小鼠随机分为4组:对照组（n=10）、EMPA 组（n=10）、HFpEF 模型组（n=20）、HFpEF+EMPA 组（n=20）。HFpEF+EMPA组小鼠在持续HFD+L-NAME联合喂养的情况下,通过灌胃的方法给予EMPA（10mg/kg/天）治疗6周,EMPA组小鼠同样通过灌胃的方法给予EMPA（10mg/kg/天）6周。同时,用灌胃的方法给予对照组和HFpEF模型组小鼠施用等体积的0.5%羟乙基纤维素（0.5%羟乙基纤维素为EMPA的溶剂）6周。灌胃剂量均为200μl/只。灌胃后6周对小鼠实施安乐死。2.小鼠一般情况的评估实验末,对不同组小鼠的体重、血压、糖耐量、肺重量和运动耐量进行测量和评估。3.心脏超声实验末,对小鼠进行经胸超声心动图检查,收集的参数包括:左心室射血分数（LVEF）、短轴缩短率（FS%）、左心室收缩末期内径（LVESD）、左心室舒张末期内径（LVEDD）、收缩末期室间隔厚度（IVSS）、舒张末期室间隔厚度（IVSD）、左心室收缩末期后壁厚度（LVPWS）、左心室舒张末期后壁厚度（LVPWD）、舒张早期二尖瓣血流峰值多普勒血流速度（E）、舒张晚期二尖瓣血流峰值多普勒血流速度（A）、舒张早期二尖瓣环心肌舒张速度峰值组织多普勒（E’）。以上测量均选用5个连续心动周期,并取5次测量结果的平均值。4.组织取材EMPA灌胃6周后,给予小鼠安乐死并取材。留取小鼠血清,离心后冻存于-80℃冰箱。对于心脏组织,一部分组织放入液氮速冻后,转存-80℃冰箱以长期保存;另一部分心脏组织直接制备新鲜组织冰冻切片或置于4%多聚甲醛固定,以备后续组织病理学检查。5.组织病理学检测心脏组织标本固定后行石蜡包埋,制备石蜡组织切片。对小鼠心肌组织切片进行HE染色,观察形态学改变;进行Masson染色,观察纤维化情况;进行WGA染色,计算心肌细胞横截面积;进行免疫组化染色,观察TNF-α和Titin的含量;取材后制备的新鲜组织冰冻切片进行DHE染色,评估ROS的水平。6.血清学检测实验末,收集小鼠血清,检测炎症因子、丙二醛（MDA）、环磷酸鸟苷（cGMP）的含量。7.总一氧化氮（NO）检测将适量心肌组织制备匀浆,用总一氧化氮（NO）检测试剂盒测定心肌中NO的水平。8.ATP检测将适量心肌组织制备匀浆后取上清,用ATP检测试剂盒测定心肌中ATP的含量。9.分子学检测在体内和体外实验中,采用Western Blot技术检测蛋白的表达。10.统计分析数据研究结果1.EMPA治疗降低了 HFpEF小鼠的体重、血压,改善了糖耐量和运动耐量（1）与HFpEF组小鼠相比,EMPA治疗6周后,显著降低了 HFpEF小鼠的体重（p＜0.001）。（2）与HFpEF组小鼠相比,EMPA治疗6周后,显著降低了 HFpEF小鼠的收缩压（SBP）（p＜0.001）和舒张压（DBP）（p＜0.01）。（3）与HFpEF组小鼠相比,EMPA治疗6周后,显著改善了 HFpEF小鼠的糖耐量（p＜0.01）。（4）与HFpEF组小鼠相比,EMPA治疗6周后,降低了 HFpEF小鼠的肺重量（肺湿重/肺干重）,但没有显著差异（p＞0.05）。（5）与HFpEF组小鼠相比,EMPA治疗6周后,显著改善了 HFpEF小鼠的运动耐量,跑步距离（p＜0.001）和跑步时间（p＜0.001）显著提高。2.EMPA治疗减轻了 HFpEF小鼠的心肌肥厚（1）与对照组小鼠相比,HFpEF组小鼠心肌表现为向心性肥厚,WGA染色显示心肌细胞横截面积显著增加（p＜0.001）,心脏重量/胫骨长度（HW/TL）比值显著增加（p＜0.001）,qPCR 结果显示心肌肥厚相关基因 ANP（p＜0.001）、BNP（p＜0.001）、β-MHC（p＜0.001）的表达显著升高。（2）EMPA治疗后,HFpEF小鼠心肌细胞的横截面积显著降低（p＜0.001）,HW/TL比值显著降低（p＜0.001）,ANP（p＜0.05）、BNP（p＜0.05）、β-MHC（p＜0.01）的表达显著降低。3.EMPA治疗改善了 HFpEF小鼠的心脏舒张功能（1）在收缩功能方面,LVEF（p＞0.05）和FS%（p＞0.05）在各组之间没有显著差异。（2）与对照组小鼠相比,HFpEF 组小鼠的 IVSS（p＜0.001）、IVSD（p＜0.001）、LVPWS（p＜0.01）和LVPWD（p＜0.001）显著增加;LVESD和LVEDD降低,但没有显著差异（p＞0.05）。EMPA治疗后,HFpEF+EMPA组小鼠的LVPWS（p＜0.05）和LVPWD（p＜0.01）显著降低,但EMPA治疗未显著改善LVESD（p＞0.05）、LVEDD（p＞0.05）、IVSS（p＞0.05）和IVSD（p＞0.05）。（3）与对照组小鼠相比,HFpEF组小鼠的舒张功能受损,表现为E/E’显著增加（p＜0.001）。E/A有升高的趋势,但没有显著差异（p＞0.05）。EMPA治疗后改善了 HFpEF小鼠的心脏舒张功能,表现为E/E’显著降低（p＜0.05）。4.EMPA治疗减轻了 HFpEF小鼠的炎症水平（1）与对照组小鼠相比,HFpEF组小鼠血清炎症细胞因子的表达显著增加,而EMPA治疗后显著降低了 HFpEF小鼠的血清炎症水平。（2）Western blot和免疫组化结果显示,与对照组小鼠相比,HFpEF组小鼠心肌中IL-1β（p＜0.01）、IL-6（p＜0.001）和 TNF-α（p＜0.001）的蛋白表达显著增加,而EMPA治疗后显著降低了 HFpEF小鼠心肌中IL-1β（p＜0.05）、IL-6（p＜0.05）和TNF-α（p＜0.001）的蛋白表达。5.EMPA治疗降低了 HFpEF小鼠心肌的氧化应激（1）与对照组小鼠相比,HFpEF组小鼠心肌中的DHE荧光强度显著增强（p＜0.001）,EMPA治疗后小鼠心肌中DHE荧光强度显著减弱（p＜0.001）。（2）与对照组小鼠相比,4-HNE的蛋白表达水平在HFpEF组小鼠心肌中显著增加（p＜0.01）,HFpEF组小鼠血清中MDA的含量也显著升高（p＜0.01）,而EMPA治疗显著降低了 4-HNE（p＜0.05）和MDA（p＜0.05）的含量。6.EMPA治疗提高了 HFpEF小鼠心脏NO的生物利用度,改善了 NO-cGMP-PKG通路（1）HFpEF小鼠心肌中eNOS单体的表达显著增加（p＜0.001）,通过Ser1177磷酸化激活的eNOS单体也显著增加（p＜0.001）,而EMPA治疗显著降低了 eNOS单体的蛋白表达（p＜0.05）和磷酸化水平（p＜0.001）。（2）NO-cGMP-PKG通路在HFpEF小鼠模型中受到抑制,表现为HFpEF小鼠心肌匀浆中NO代谢物显著减少（p＜0.01）、血清中cGMP含量显著降低（p＜0.001）、心肌中PKG蛋白表达显著降低（p＜0.01）,免疫组化结果也显示Titin总蛋白表达显著增加（p＜0.001）。而EMPA治疗后,小鼠心肌匀浆中NO代谢物显著增加（p＜0.01）、血清中cGMP含量显著升高（p＜0.001）、心肌中PKG蛋白表达显著升高（p＜0.01）,免疫组化结果显示Titin总蛋白表达显著降低（p＜0.05）,提示Titin磷酸化增多。7.EMPA治疗改善了 HFpEF小鼠的心肌能量代谢,增加了 ATP的生成（1）在脂质代谢方面,HFpEF 小鼠心肌中 Cpt1b、Cpt2、Cd36、Acadm、Acad10、Hadh、Acot2、Decr1等参与脂肪酸氧化的蛋白表达显著增加（p＜0.05）,而EMPA治疗没有改变脂肪酸氧化关键蛋白表达的水平。HFpEF小鼠心肌中脂联素（Adipoq）的表达显著降低（p＜0.05）,而EMPA治疗后,Adipoq的表达显著增加（p＜0.05）。（2）在碳水化合物代谢方面,EMPA治疗后,参与葡萄糖有氧氧化的关键酶PDH磷酸化水平显著降低（p＜0.05）,参与糖酵解途径相关的酶中,包括Hk2、Eno3在EMPA治疗后显著降低（p＜0.05）;Pfk1、Pkm在EMPA治疗后的表达降低,但没有显著差异（p＞0.05）。（3）在酮代谢和支链氨基酸（BCAAs）代谢方面,酮体分解代谢的关键酶Bdh1,在HFpEF小鼠心脏中表达显著降低（p＜0.05）,但其表达水平不受EMPA治疗的影响;BCAAs分解代谢的限速酶Bckdha在HFpEF小鼠心脏中表达显著降低（p＜0.05）,但其表达水平也不受EMPA治疗的影响。（4）HFpEF小鼠心肌中,线粒体复合体Ⅰ-Ⅳ相关成分,例如Ndufs4、Sdha、Uqcrfs1和Ndufa4的表达显著降低（p＜0.05）,而EMPA治疗显著改善了线粒体复合体Ⅰ-Ⅳ相关成分的表达。EMPA治疗后,显著增强了 ATP合成酶的表达水平,例如Atp5f1d和Atpaf1,这提示EMPA治疗提高了心肌ATP的产生。研究结论1.EMPA治疗改善了 HFpEF小鼠的糖耐量和运动耐量。2.EMPA治疗减轻了 HFpEF小鼠的心肌肥厚。3.EMPA治疗通过NO-cGMP-PKG通路,改善了 HFpEF小鼠的心脏舒张功能。4.EMPA治疗改善了 HFpEF小鼠的心肌能量代谢。