第一部分人ZBED3基因真核表达载体的构建及鉴定目的：构建人ZBED3基因真核表达载体（pIRES2-EGFP-ZBED3），为下一步实验打下坚实的基础。方法：本实验运用RT-PCR的方法从人骨骼肌组织中获取ZBED3cDNA片段,经双酶切并连接重组至真核表达载体pIRES2-EGFP，构建pIRES2-EGFP-ZBED3的重组质粒。而后，经酶切及DNA测序鉴定pIRES2-EGFP-ZBED3重组质粒鉴定以保证后续实验的有效进行。结果：将双酶切后的pIRES2-EGFP-ZBED3重组质粒和未经过酶切处理的重组质粒一起，采用琼脂糖凝胶电泳的方法进行鉴定，前者出现长度为687bp的ZBED3cDNA产物和5.3kb左右的pIRES2-EGFP线性化质粒两条带，后者则出现长度为5.98kb左右的pIRES2-EGFP-ZBED3重组质粒的条带，经过初步鉴定，认为pIRES2-EGFP-ZBED3重组质粒构建成功。测序结果经DNAssist对比分析之后进一步证实所克隆的基因为人ZBED3cDNA。结论：本实验成功构建了人真核表达载体pIRES2-EGFP-ZBED3，可为接下来证明ZBED3锌指蛋白是分泌蛋白奠定坚实的基础。第二部分分泌蛋白ZBED3的验证目的：通过细胞水平的实验验证ZBED3是分泌蛋白，为探讨ZBED3在生物体正常及疾患时血浆及组织分布奠定实验基础。方法：培养HEK293T细胞，在细胞生长状态良好时收集细胞并提取细胞蛋白；利用低温冷冻干燥抽吸技术去除培养液中的水分，适度浓缩细胞培养液并提取蛋白。分成阴性对照组、空白质粒转染组和目的质粒转染组三组进行实验，western blot测定三组HEK293T细胞以及其细胞培养液中的ZBED3蛋白的表达。结果：阴性对照组、空白质粒转染组和目的质粒转染组三组的HEK293T细胞及细胞培养液均观察到ZBED3蛋白的特异性表达，且是目的质粒转染组高于空白质粒转染组和阴性对照组。结论：ZBED3锌指蛋白是分泌蛋白。第三部分ZBED3与2型糖尿病的初步关系目的：探讨ZBED3与2型糖尿病的初步关系。方法：利用RT-qPCR的方法观察小鼠多处组织ZBED3mRNA相对表达量；培养正常小鼠和db/db小鼠肝脏组织块，用不同浓度葡萄糖、胰岛素、利拉鲁肽刺激后，采用western blot技术测定其ZBED3蛋白表达差异；运用RT-qPCR和western blot方法观察NGT组和T2DM组ZBED3表达差异。结果：ZBED3mRNA在小鼠多处组织中均有不同程度的表达，以肌肉、脾、肾的相对表达量最高；db/db小鼠肝脏组织块ZBED3蛋白表达明显高于正常小鼠（P<0.05），采用胰岛素、利拉鲁肽刺激后的结果与前述一致（前者P<0.01，后者P<0.05）；利用四种不同浓度的葡萄糖进行干预后，经10nmol/L浓度的葡萄糖刺激后，db/db小鼠肝组织ZBED3蛋白表达升高最明显（P<0.01），5nmol/L浓度的葡萄糖刺激后db/db小鼠肝组织ZBED3蛋白表达变化最小；T2DM组骨骼肌、脂肪组织中ZBED3表达明显高于NGT组（P<0.01）。结论：胰岛素和利拉鲁肽能刺激ZBED3的分泌和释放，ZBED3的表达呈现出明显的胰岛素浓度依赖性，ZBED3可能是胰岛素信号通路下游的一个重要因子；ZBED3的释放在某一浓度的葡萄糖刺激下达到最高，之后随着葡萄糖浓度的增加，ZBED3的分泌和释放不再增加，其作用达到一个平台期；T2DM组骨骼肌、脂肪的ZBED3表达明显高于NGT组，提示ZBED3可能起到了对2型糖尿病的一种保护和代偿作用。