MicroRNA-21靶向Fas Ligand抑制结肠癌细胞的凋亡和对5-FU的化学敏感性

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结肠癌是全球死亡率第三高的恶性肿瘤。有研究表明miRNA及其相关靶基因都与肿瘤细胞耐药性增加和细胞凋亡有关。本文揭示miR-21及其靶基因FasL在结肠癌细胞发展过程中的关系。本实验主要通过软件TargetScan, PicTar, microRNA.org 和 miRecords 及 q-RT-PCR预测miR-21的靶基因,双荧光素酶报告系统确定FasL为miR-21的直接靶基因。Pre-miR-21, siFasL和对照NC分别转染进RKO-WT细胞,通过CCK-8检测细胞活性,同时通过q-RT-PCR和Western Blotting检测FasL的表达及caspase-3和裂解caspase-3的蛋白表达水平,得到以下结果:1.结肠癌RKO细胞中,FasL为miR-21的直接靶基因;2.MiR-21通过靶向FasL的3’UTR区抑制其在:nRNA和蛋白水平的表达;3.外源的pre-miR-21前体转染进RKO-WT细胞,使miR-21过表达,明显抑制FasL的表达,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡;4.外源的siFasL转染进RKO-WT细胞,使FasL表达被抑制,会促进细胞增殖,抑制细胞凋亡;5.5-FU处理RKO细胞48小时,促使FasL在RNA和蛋白水平高表达;6.miR-21抑制FasL的表达,增加结肠癌RKO细胞对5-FU的化学耐药性,细胞凋亡水平降低,裂解的caspase-3蛋白表达水平降低。以上结果表明,miR-21通过靶向FasL的3’UTR区抑制FasL在mRNA和蛋白水平的表达,从而抑制FasL所参与的信号通路,使结肠癌细胞凋亡水平下降,增加结肠癌RKO细胞对5-FU的化学耐药性。而过表达miR-21或者敲低FasL的表达均会降低细胞凋亡水平,降低RKO细胞对5-FU的敏感性,说明miR-21和FasL都可能成为临床治疗结肠癌的靶点。
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