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莠去津(Atrazine)是常用的一种三嗪类除草剂,同时也是一种被世界公认的环境内分泌干扰物。近年来发现大量莠去津通过各种途径被释放并且进入地表和地下水中造成水体污染。有研究表明莠去津能够对多种动物发育产生影响。中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)俗称河蟹、大闸蟹,是我国重要的经济蟹类之一,由于生命历程以及环境的原因,外界很多因素都会对中华绒螯蟹造成影响。各种动物的细胞在正常的生理过程(如复制、重组)或暴露于各种环境因素(如活性氧、甲基化试剂、紫外线及其他电离辐射、农药)中,细胞的DNA都可能发生损伤,从而阻滞细胞周期进程或引起病变,甚至导致细胞死亡。中华绒螯蟹生长发育的过程中生精细胞是否会产生损伤,水体污染物(如莠去津)又会对其造成怎样的影响,值得研究探讨。本实验以中华绒螯蟹作为研究对象,采用莠去津梯度暴露方式,利用免疫荧光、流式细胞仪检测、TUNEL检测等技术方法,从生精细胞的表观修饰变化、DNA损伤程度、细胞死亡以及减数分裂情况等几个方面,探究了4种浓度梯度(0.001 mg/L、0.01 mg/L、0.1 mg/L、1 mg/L)下莠去津对中华绒螯蟹生精细胞的生殖毒性效应。主要研究结果概括如下:1、DNA电泳检测中华绒螯蟹生精细胞DNA结果显示:与对照组相比0.1 mg/L和1 mg/L实验组DNA条带发生弥散,说明莠去津对中华绒螯蟹生精细胞存在影响。2、TUNEL检测中华绒螯蟹生精细胞DNA损伤结果显示:中华绒螯蟹生精细胞莠去津梯度暴露24 h,1 mg/L莠去津梯度暴露组DNA损伤高于对照组(P<0.05)。3、免疫荧光检测中华绒螯蟹生精细胞γ-H2AX蛋白结果显示:中华绒螯蟹生精细胞内存在γ-H2AX蛋白,并且随着莠去津浓度的增加,γ-H2AX蛋白也有增加的趋势。4、流式细胞仪检测中华绒螯蟹生精细胞γ-H2AX蛋白量变化结果显示:1 mg/L的莠去津染毒组和其他组相比存在显著性的差异(P<0.05)。并且相对于其他种类的生精细胞而言,精原细胞γ-H2AX蛋白量变化更加显著。5、流式细胞仪检测中华绒螯蟹生精细胞死亡结果显示:(1)随着莠去津暴露浓度的升高,活细胞率比例下降,中晚期凋亡细胞和死细胞的比例上升,说明莠去津对中华绒螯蟹生精细胞存在毒性影响;(2)相对比精细胞和精子,精原细胞和精母细胞死亡率有上升的趋势。6、流式细胞仪检测莠去津暴露后中华绒螯蟹生精细胞减数分裂结果显示:各莠去津暴露组和对照组之间均存在显著性差异(P<0.05),并且随着浓度的提高,中华绒螯蟹生精细胞减数分裂有增强的趋势。莠去津对中华绒螯蟹生精细胞减数分裂存在促进作用。综上,细胞培养后DNA检测结果显示0.001 mg/L和1 mg/L实验组DNA条带与对照组相比变化较为明显;免疫荧光结果显示细胞中存在γ-H2AX蛋白;流式细胞仪检测γ-H2AX蛋白量变化、细胞死亡检测以及减数分裂检测则显示染毒组和对照组之间存在显著性差异(P<0.05),说明莠去津对中华绒螯蟹有一定的生殖毒性,具体的作用机制仍需要进一步探究。