【摘 要】
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研究背景及目的死后化学变化是各种尸体现象的物质基础,但死后化学最显著特征就是随着死亡时间的多样性变化,因此探索死后化学变化规律在法医学领域具有重要意义。死后蛋白质降解是死后化学变化的重要组成部分,有关死后蛋白质用于法医学鉴定的研究很长一段时间处于停滞状态。组学技术的发展使得从蛋白质和其降解代谢物整体来研究死后蛋白质降解成为可能。靶向代谢组学可实现对氨基酸绝对定量。蛋白质组学可系统分析蛋白质的含量、
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目:中暑死的法医学鉴定标记物研究(项目号81273336)(2020年);
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研究背景及目的死后化学变化是各种尸体现象的物质基础,但死后化学最显著特征就是随着死亡时间的多样性变化,因此探索死后化学变化规律在法医学领域具有重要意义。死后蛋白质降解是死后化学变化的重要组成部分,有关死后蛋白质用于法医学鉴定的研究很长一段时间处于停滞状态。组学技术的发展使得从蛋白质和其降解代谢物整体来研究死后蛋白质降解成为可能。靶向代谢组学可实现对氨基酸绝对定量。蛋白质组学可系统分析蛋白质的含量、功能等特征。利用代谢组学和蛋白质组学系统探讨死后蛋白质降解,有助于全景式地揭示死后蛋白质降解的特点和规律;突破死亡间隔(Postmortem interval,PMI)研究的瓶颈。材料与方法1.实验动物使用SD雄性大鼠,麻醉后脱颈处死,放置于恒温恒湿实验箱内,连续观察14天。进行腐败评分及腐败分期;切取左心室心肌组织,液氮速冻后置入-80℃冰箱待测。2.茚三酮显色法检测总氨基酸,靶向代谢组学技术检测各氨基酸浓度死后的时序性变化。3.蛋白质组学技术筛选死后心肌组织差异蛋白,并根据GO注释及Pathway等结果分析蛋白质降解的时序性变化特点。4.利用Western blot技术验证筛选蛋白质随死亡时间的含量变化。5.设15℃、25℃以及35℃三组,筛选规律的12种氨基酸,分析温度对于氨基酸生成的影响。在各温度组建立PMI推断的多元回归模型。研究结果1.在恒定(温度25℃,湿度50%)环境下,大鼠腐败分期:0-2天为新鲜期,3-11天为活跃腐败期,11-14天为高腐期。2.0-14天α-氨基酸浓度总体呈上升趋势,在0-10天内与死亡时间呈线性相关。3.中性非极性氨基酸浓度呈线性增加,酸性氨基酸中谷氨酸在死后10天内仍与死亡时间的有较好的相关性。碱性氨基酸以及中性极性氨基酸变化规律与PMI相关性较差。4.蛋白质降解过程中呈现九类时序性变化趋势,其中规律性降解的占60%以上,部分酶类蛋白质含量先增高后降低的特点。大部分胞膜蛋白质在死后呈持续降解。5.Western blot结果提示,筛选蛋白质变化趋势与蛋白组学技术检测结果基本一致。6.筛选的氨基酸死后变化趋势相似,温度增高加快了这种趋势变化,另外建立了多个PMI推断的多元回归方程。结论1.死后蛋白质降解呈现相对有序到无序的变化。2.死后一定时间内,大部分氨基酸与PMI呈线性相关,其中谷氨酸规律性升高的时间最长。3.死后心肌蛋白质降解存在明显的异质性。部分酶类蛋白在PMI早期呈升高,可能与其超生反应阶段的变化有关。4.不同温度组,规律变化的氨基酸对PMI具有一定的预测能力。随着温度升高,模型的预测时间缩短。
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