【摘 要】
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酸枣仁作为我国常用的药食同源物之一,富含皂苷、酚酸、黄酮类、多糖、氨基酸等活性成分。具有明显的抗氧化、抗炎、镇定安眠作用。主产地有陕西、河北、河南、内蒙古等。酸枣仁多糖具有多种生物活性。研究表明酸枣仁多糖在免疫调节活性方面具有重要意义。本研究首先利用Box-Behnken响应面法优化酸枣仁多糖回流提取工艺,采用大孔树脂静态脱色工艺和多种分离纯化技术制备酸枣仁多糖,并对检测其理化性质及结构特征。在此
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酸枣仁作为我国常用的药食同源物之一,富含皂苷、酚酸、黄酮类、多糖、氨基酸等活性成分。具有明显的抗氧化、抗炎、镇定安眠作用。主产地有陕西、河北、河南、内蒙古等。酸枣仁多糖具有多种生物活性。研究表明酸枣仁多糖在免疫调节活性方面具有重要意义。本研究首先利用Box-Behnken响应面法优化酸枣仁多糖回流提取工艺,采用大孔树脂静态脱色工艺和多种分离纯化技术制备酸枣仁多糖,并对检测其理化性质及结构特征。在此基础上以结肠癌细胞Caco-2为细胞模型探究酸枣仁酸性多糖的对其保护作用,主要成果如下:1.酸枣仁多糖提取工艺利用热水回流及Box-Behnken响应面法优化,各因素对酸枣仁多糖提取率的影响大小为:Na OH浓度（C）＞料液比（B）＞提取时间（A）。由回归分析结果得出酸枣仁多糖提取工艺最佳条件为:Na OH溶液浓度0.59 mol/L、回流时间2.36h、料液比1:16.56（g/m L）,预测值为1.98%。在此基础上重复3次实验,测得多糖提取率均值为1.96%,将实际测得值与预测值比较,相差0.02%,误差较小,表明本试验的模型对预测各因素与效应面之间的变化关系是可行的。2.在粗多糖筛选的基础上,进行树脂脱色处理,综合考虑选用H103作为多糖脱色的树脂。当树脂用量为0.3g/m L,多糖浓度为3mg/m L,脱色时间为4h时效果最佳。采用DEAE-Sephrose-Fast-Flow柱层析洗脱分离纯化多糖,经不同浓度Na Cl溶液洗脱后的多糖馏分量依次为0 mol/L＞0.2 mol/L＞0.3 mol/L＞0.5 mol/L。合并相同组分,经透析、浓缩冷冻干燥后获得4个不同多糖组分,分别命名为ZY-1、ZY-2、ZY-3和ZY-4。经过纯度鉴定ZY-2、ZY-3、ZY-4的纯度较高。不含核酸、蛋白等物质。3.外部形态、微观观察发现,多糖ZY-1、ZY-2、ZY-3和ZY-4为乳白色,呈疏松、多孔、絮状,且无明显气味。溶于蒸馏水,不溶于有机溶剂。显色反应结果表明4种多糖为还原性多糖。HPLC-ELSD法测定ZY-1分子量为109.39、8.91 k Da。而ZY-2、ZY-3和ZY-4为分子量为7.76、10.71、8.31k Da。HPLC柱前衍生法测得各多糖单糖组成为:阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、木糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、甘露糖、半乳糖等单糖。红外光谱表明4种多糖在3423～3456cm-1、2915～2937cm-1、1400～1420cm-1、1062～1086cm-1、619～669 cm-1范围具有多糖特征吸收;核磁共振波谱（~1H-NMR）表明4种多糖主要由a-吡喃糖组成。刚果红实验结果表明4种多糖不具有三股螺旋结构。综上所述ZY-2、ZY-3和ZY-4为酸性多聚吡喃糖。4.MTT实验表明,酸枣仁酸性多糖ZY-2、ZY-3和ZY-4作用于Caco-2细胞24 h后,高浓度（25μg/m L）的酸枣仁多糖可以显著促进Caco-2细胞的增殖。Western Blot实验表明,不同浓度的4种多糖作用于LPS诱导损伤的Caco-2细胞24 h后,使得Caco-2细胞紧密连接蛋白表达量的增加,且具有一定的剂量依赖性。RT-PCR实验结果表明,酸枣仁酸性多糖作用于LPS诱导损伤的Caco-2细胞后,能够显著降低炎症因子水平,以上实验结果表明,酸枣仁酸性多糖ZY-2、ZY-3和ZY-4对Caco-2细胞具有保护作用。
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