红皮云杉球果原花青素分离纯化、配合物及体外抗氧化研究

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原花青素是一类多酚物质,具有特殊医疗保健功能,有广泛的药效和很小的副作用,在化妆品、保健品、药品及多种饮料产品等领域应用广泛,开发应用价值很高。本文以红皮云杉球果鳞片为原料,对球果鳞片中的原花青素进行提取工艺优化,研究纯化工艺及原花青素一级精制物的抗氧化能力,并利用二次纯化提高纯度与Fe2+、Zn2+、牛血清蛋白配合性质试验,制备原花青素高聚体并对其进行水解工艺的研究,研究结果如下:(1)通过采用13种不同极性的提取溶剂对红皮云杉球果鳞片中多酚类物质进行提取,并测定总多酚、黄酮和原花青素的含量和13种粗提物的清除DPPH·能力,清除·OH能力和还原力;并分析活性物质含量与抗氧化指标的相关性,研究表明,一定比例的丙酮和乙醇水溶液可以提高提取能力和抗氧化活性。原花青素是红皮云杉球果鳞片多酚的主要组成部分,在提取物的整体抗氧化活性起到主导作用。(2)通过单因素和响应面方法优化红皮云杉球果原花青素提取工艺:提取剂60%乙醇,提取温度51℃、提取时间2h、料液比为1:44(g/mL),在此最佳条件下,提取红皮云杉球果原花青素得率为(72.23±0.35)mg/g,(3)通过筛选树脂及单因素方法优化条件,确定红皮云杉球果原花青素D4020的纯化工艺为:上样浓度:2.5mg/mL;洗脱剂:60%乙醇;流速:2.5mL/min;径高比:1:25;最大上样量:40mL;最大洗脱剂体积:200mL。纯化前原花青素纯度为(29.45±1.33)%,纯化后纯度:(60.57±1.78)%,回收率:(88.27±3.18)%。体外抗氧化研究结果表明红皮云杉球果原花青素精制物具有较强的自由基清除能力和还原能力,并且还原能力高于阳性对照Trolox。(4)通过树脂筛选及纯化单因素考察,确定红皮云杉球果原花青素NKA-9的二次纯化工艺:上样浓度:3.0mg/mL;洗脱剂:60%乙醇;径高比:1:25;洗脱剂pH:7,最大上样量:40mL;最大洗脱剂体积:200mL。配合试验结果表明,原花青素与Fe2+螯合的最佳条件:原花青素浓度为8mg/mL,温度为30℃,pH为6。与Zn2+螯合的最佳条件:原花青素浓度为5mg/mL,温度为40℃,pH为4。与牛血清蛋白络合的最佳条件:原花青素浓度为3mg/mL,温度为40℃,pH为6。配合物体外抗氧化活性研究:原花青素与Fe2+、Zn2+、牛血清蛋白的配合体,清除ABTS+、DPPH·的能力和还原力较原花青素均有一定程度的增强。(5)红皮云杉球果鳞片原花青素高聚体水解工艺,亚硫酸为最佳水解介质;亚硫酸的添加量为0.8mL:水解温度定为60℃;水解时间定为30min,原花青素高聚体的平均聚合度由4.15降至1.03。水解后原花青素对DPPH·清除率明显增大。
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