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丁酸具有非常广泛的用途,是化工、食品加工和制药等的重要原料,利用生物质生产丁酸对于相关行业的可持续发展具有重要意义。木聚糖是自然界储量最为丰富的糖类之一,是硬木和谷类秸杆半纤维素的主要组成成分。对于木聚糖发酵的研究,目前主要集中于氢气和工业溶剂乙醇的生产方面,但专注于发酵产丁酸的研究还不多见。本文以开发发酵木聚糖产丁酸的菌种为目标,开展了发酵木聚糖产丁酸菌种的分离筛选与鉴定、生长代谢特性等研究,并对其发酵条件进行了优化。 在前期研究中,以预处理的水稻秸秆为底物,从牛粪、猪粪、土壤和腐木的混合物富集得到了具有显著丁酸发酵特征的混合菌群。本研究以木聚糖为选择性底物,从该混合菌群中分离到5株能够发酵木聚糖产丁酸的细菌,并从中优选到一个产丁酸能力较强的菌株KM10。经形态、生理生化和16SrDNA鉴定,确定KM10为丁酸梭菌(Clostridium butyricum)的一个新菌株。 菌株KM10不仅可以发酵木聚糖产丁酸,也可发酵葡萄糖产丁酸。利用Logistic和Leudeking-piret模型对菌株KM10的生长和代谢动力学特征的研究结果表明,以木聚糖和葡萄糖为碳源时,其在对数生长期的最大比生长速率分别为0.33和0.43 h-1,倍增时间为2.1和1.6 h,底物降解速率分别为0.17和0.26 g/L·h,丁酸产生速率分别为0.065和0.078 g/L·h。 为了进一步提高菌株KM10发酵木聚糖产丁酸的能力,就温度、氮源、pH和碳源对其生长代谢的影响进行了研究,优化了培养条件。结果表明,菌株KM10生长代谢的最适温度为32℃左右,高于37℃的温度对其生长速率、丁酸产率以及底物降解速率都会产生抑制作用。在铵盐中,NH4NO3是最为理想的氮源,适量的NH4NO3可使木聚糖发酵系统的丁酸产量和木聚糖降解率分别达到0.42 g/L和37%。如果将发酵系统的初始pH调节为8,则可进一步将丁酸产量和木聚糖降解率提高到0.96 g/L和40%。尽管菌株KM10也可以发酵纤维二糖、木糖、蔗糖、淀粉、乳糖和阿拉伯糖,但其丁酸产量均低于葡萄糖的3.44 g/L。 C.butyricumKM10为专性厌氧菌,G+,以糖类为底物的发酵产物以丁酸、乙酸和氢气为主,具有较强的发酵木聚糖产丁酸能力,是一株具有良好开发前景的菌种资源。