【摘 要】
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链霉菌Streptomyces sp.G（?）66分离自德国哥廷根土壤,前期已分离鉴定了其主产物isatropolones,完成了全基因组测序并阐明了这类主产物的生物合成机制。然而,通过antiSMASH分析发现该菌基因组上存在多个编码未知次级代谢产物的基因簇。为了能够进一步挖掘该菌可能产生的潜在新颖天然产物及其生物合成基因的功能,本论文围绕G（?）66菌株开展了以下研究:（1）对该菌株进行抗生素
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链霉菌Streptomyces sp.G（?）66分离自德国哥廷根土壤,前期已分离鉴定了其主产物isatropolones,完成了全基因组测序并阐明了这类主产物的生物合成机制。然而,通过antiSMASH分析发现该菌基因组上存在多个编码未知次级代谢产物的基因簇。为了能够进一步挖掘该菌可能产生的潜在新颖天然产物及其生物合成基因的功能,本论文围绕G（?）66菌株开展了以下研究:（1）对该菌株进行抗生素敏感性实验、摸索其原生质体制备条件,建立并优化了该菌株的遗传操作系统,同时由于isatropolones产量极高,可能影响其它次级代谢产物的分离及检测,通过基因敲除中断该化合物的生物合成途径以排除干扰,最终构建了背景相对干净的突变株;（2）通过基因组挖掘策略,分别运用Gibson assembly同源重组技术和Red/ET直接克隆法,成功对G（?）66菌株中编码多环特特拉姆酸大环内酰胺（Polycyclic Tetramate Macrolactams,PTMs）类化合物的ptm生物合成基因簇进行了克隆,并导入了异源宿主S.lividans K4-114中构建了异源表达菌株。发酵后通过LC-MS分析确定该异源表达菌株成功表达了目标化合物,但由于发酵量不足导致分离纯化所得产物过少,无法通过核磁进行进一步结构鉴定;（3）首次利用OSMAC策略尝试在大米和液体培养基中混合发酵G（?）66野生菌,并从中分离得到了 5个已知的单体化合物,文献调研发现这5个化合物的生物合成途径尚未被报道。通过上述研究,我们可以成功地将外源DNA导入G（?）66野生菌中,为后续在野生菌中进行进一步基因组编辑以激活其他潜在的新颖天然产物提供了基础;通过基因组挖掘策略,在异源宿主中实现了 PTM基因簇的成功表达,不仅可以充实PTM类化合物库,同时也为异源激活其他未知基因簇提供了技术支撑;利用OSMAC策略从野生菌中分离鉴定了 5个化合物,后续可分别对这些化合物开展多种生物活性测定,同时挖掘其生物合成基因簇,阐明这些化合物的合成机制,为新药的发现以及合成生物学研究提供更多研究基础和基因资源。
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目的:心肌梗死（myocardial infarction,MI,以下简称为“心梗”）作为缺血性心脏病最严重的一种类型,是我国城乡居民致残致死的主要原因,常导致心力衰竭、心源性猝死等一系列并发症。心肌细胞凋亡是心梗的一个重要的病理特征,其始于长时间的心肌缺血,是冠脉闭塞导致心肌损伤的主要形式。在心梗后数小时至数天内,梗死区及边缘区均可见凋亡的心肌细胞;此外,细胞坏死也常继发于凋亡,且多发生在凋亡活
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高脂血症是一种常见的代谢性疾病,容易引发各种心血管疾病。姜黄能有效防治高脂血症,但其降脂作用机制并不完全明确。本课题通过高脂饮食诱导建立了C57BL/6J小鼠高脂血症模型,在饮食中添加姜黄对小鼠进行干预,并测定了血浆和肝脏中的脂质生化指标。接着采用蛋白质组学和转录组学方法分析了小鼠肝脏蛋白质和基因的相对表达水平,并采用生物信息学方法筛选出了与姜黄降脂相关的关键蛋白、基因和通路。最后采用Wester
目的:本研究拟从体内外水平评价m PEG2k-PDLLA5k、m PEG5k-PDLLA5k、m PEG5k-PLLA5k、m PEG5k-PDLA5k和m PEG5k-PDLLA10k5种聚合物胶束对有机阳离子转运体1-3（OCT1-3）转运功能的影响。方法:（1）采用~1H NMR和芘荧光探针法分别测定了聚合物分子量和临界胶束浓度。通过薄膜水化法和溶剂挥发法制备聚合物胶束,并采用DLS、TEM
糖是常见的生活必需品,更是生命活动必不可少的能量物质和信息分子。化学合成是目前获得足量结构确定的寡糖分子最有效的手段,开发高效便捷的寡糖合成策略则是糖化学领域的中心任务。在传统的寡糖液相合成中,糖砌块在溶液相中反应结束之后,产物一般都需要通过柱层析进行纯化,这一过程耗时费力且需要使用大量有机溶剂。固相合成技术的运用大大降低了寡糖的纯化难度。但是,由于糖苷化反应以非均相的方式进行,因此需要消耗大大过
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