背景:肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是当今世界最为常见的恶性肿瘤之一,其发病率与死亡率均居所有恶性肿瘤前列。尽管以外科手术治疗为主的综合治疗体系已经形成,但目前肝癌治疗预后仍不理想。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在恶性肿瘤的发生发展过程中起着重要作用。以索拉非尼为代表的EGFR信号通路相关分子靶向药物,是目前临床上使用最为广泛的抗肿瘤药物之一;然而,其在肝癌治疗中的效果并不十分理想,且耐药现象逐渐增多,亟需发现新的有效干预靶点。表皮生长因子受体通路底物8(epidermal growth factor receptor pathway substrate 8,EPS8)家族的发现,有望为EGFR分子靶向药物的研发提供新的靶点选择,为肝癌的临床诊治提供新的理论依据,具有重要的研究意义与临床价值。目的:本研究基于公共数据库与临床样本,探索EPS8家族成员EPS8L3在肝细胞肝癌中的表达与功能,明确其表达水平与临床特征间的关系,通过体内外研究阐明其对肝细胞肝癌增殖、迁移与侵袭等能力的影响以及相关分子机制,为肝细胞肝癌的诊治提供潜在治疗靶点。方法:1.基于TCGA、GTEx、GEPIA以及COSMIC等数据库,研究EPS8家族在恶性肿瘤中的表达情况、相互关系以及基因突变情况。2.收集肝癌等临床标本,通过q RT-PCR、蛋白免疫印迹、免疫组织化学技术研究EPS8L3在肝癌中的表达,分析其表达水平与临床信息的相关性。3.利用慢病毒稳转以及RNAi技术,影响EPS8L3在m RNA水平的表达;使用CCK8实验检测其增殖能力,集落形成实验检测其集落形成能力,流式细胞仪检测细胞周期变化,Transwell以及划痕实验检测细胞的迁移与侵袭能力。4.通过构建人肝癌裸鼠皮下成瘤模型以及肝原位成瘤模型,检测其对体内增殖能力的影响;构建人肝癌裸鼠肺定植模型,检测其对体内肺定植能力的影响。5.通过q RT-PCR、蛋白免疫印迹等实验检测EPS8L3对细胞周期、上皮间质转化、细胞干性以及肝细胞分化等的影响。6.通过蛋白免疫印迹、流式细胞、免疫荧光等技术检测EPS8L3与EGFR、SOS1以及ABI1的关系,明确其参与的信号通路。结果:1.EPS8家族中仅EPS8L3在肝癌组织中的m RNA表达明显高于癌旁或正常肝脏组织,家族成员间并无明显相关性。EPS8L3在基因水平的点突变、拷贝数变异以及甲基化水平均较低,基因过表达水平相对较高。2.EPS8L3在肝癌组织中表达升高,且其表达水平与肿瘤组织学分级以及患者预后密切相关。3.EPS8L3沉默后,肝癌细胞增殖、集落形成、迁移与侵袭能力均有所减弱,细胞周期阻滞;过表达后,肝癌细胞上述能力均有所增强,细胞周期进展。4.EPS8L3沉默后,肝癌细胞裸鼠皮下成瘤能力以及肺定植能力减弱;EPS8L3过表达后,肝癌细胞裸鼠皮下成瘤以及肝原位成瘤能力均有所增强。5.EPS8L3可降低细胞周期相关调控分子p21/p27的表达,增加上皮间质转化相关的MMP2的表达,但对细胞干性以及肝细胞分化并无明显影响。6.EPS8L3敲低后,EGFR的二聚体化以及EEA1介导的内吞过程受到抑制,下游主要信号通路EGFR-ERK的激活减弱,但EPS8L3与SOS1以及ABI1在表达上并无明显相关性。结论:EPS8L3在肝癌组织中表达升高,且其表达与肿瘤组织学分级及患者预后相关;EPS8L3可通过抑制p21/p27的表达促进细胞周期进展从而增强肝癌细胞的增殖能力;EPS8L3可通过促进MMP2的表达促进肝癌向间质表型转化从而增强肝癌细胞的迁移与侵袭能力;EPS8L3可通过促进EGFR的二聚体化以及EEA1介导的内吞过程,增强EGFR-ERK信号通路的激活,进而影响肝癌细胞的增殖与转移能力,但这一过程并不依赖与SOS1、ABI1形成复合体。以上研究结果表明,EPS8L3在肝细胞肝癌的发生发展中发挥着重要的作用,且其参与EGFR相关信号通路的调节过程,有望成为EGFR分子靶向药物研究的潜在靶点,为临床肿瘤治疗提供新的理论依据。