基于磁性微粒的黄曲霉毒素样本净化及层析试纸条研究

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黄曲霉毒素是一类具有极强毒性和三致性(致癌、致畸、致突变)的真菌毒素,普遍存在于食品和饲料当中,世界各国对食品中黄曲霉毒素的残留量都有严格控制。但在检测之前,需对样品中的黄曲霉毒素进行富集提取。基于磁性复合微粒,本研究开展了食品中黄曲霉毒素B1(AFB1)和总黄曲霉毒素(AFT)的净化研究,并以GoldMag金磁微粒为载体开展了黄曲霉毒素B1快速层析检测技术研究。具体内容和结果如下:1、选择特异性抗体,制备了针对黄曲霉毒素B1和总黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)的免疫磁性微粒。表面偶联10μg抗黄曲霉毒素B1或总黄曲霉毒素单克隆抗体的1mg异硫氰酸根末端磁粒可以达到最佳的净化能力,可分别从花生样品中提取得到17.5ngAFB1和18ng AFT。2、将两种免疫磁粒用于净化不同食品样本中的黄曲霉毒素。结果表明:对玉米和小麦样品黄曲霉毒素的净化能力优于花生和核桃样品。AFBl免疫磁粒对上述四种样品的回收率均达到98%以上,相对标准偏差小于8.5%。AFT免疫磁性微粒对AFB1和AFG1回收率大于98%,小麦和玉米回收率达到100%,相对标准偏差在3.99%~8.29%之间,而AFB2和AFG2回收率在84%~91%之间,相对标准偏差在6.02%~7.86%之间,表明对AFB1和AFG1的净化能力比AFB2和AFG2总体上更好。3、制备了黄曲霉毒素B1金磁微粒标记抗体复合物。1mg GoldMag(?)金磁微粒偶联抗体的最大量为117.2μ g,最适偶联条件为25℃、180rpm震荡孵育1.5h。4、金磁标记层析试纸条的评价。可目视化定性检测线为4ng/ml。磁信号定量检测限为0.1-0.3ng/ml,定量检测范围为0.3ng/ml-4ng/ml。通过试纸条可实现从小麦、玉米、花生和花生油等样本中黄曲霉毒素B1的检测。
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