作为我国第二大肉类消费品的家禽,产肉性能是鸡最具经济价值的性状之一。其中,成肌细胞的增殖、分化是肌肉发育最关键的步骤。因此,成肌细胞的增殖与分化机制的解析已成为鸡产肉性能研究的热点之一。研究表明,VGLL2(Vestigial like family member2)属于VGLL家族,在哺乳动物、爬行动物和两栖动物中的序列较为保守,并且其表达量随着成肌细胞的分化而上升,因此VGLL2基因对动物骨骼肌的生长发育起着极其重要的作用,但其在鸡骨骼肌发育过程中的作用尚不清楚。为此,本研究首先通过生物信息学方法分析了VGLL2在不同物种、不同组织之间表达量的差异;利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)技术分析VGLL2基因时空表达特征和时序表达特征;体外分离培养并诱导鸡原代成肌细胞分化,检测了VGLL2基因在成肌细胞增殖分化过程中的表达趋势:利用过表达和RNA干扰技术,分析VGLL2基因对成肌细胞增殖与分化的生物学效应,从细胞水平揭示了 VGLL2基因对鸡成肌细胞增殖和分化的影响以及潜在的作用机制;通过体外注射VGLL2腺病毒,分析VGLL2对雏鸡日增重和肌肉发育过程中肌纤维特性如肌纤维直径、数量和密度的影响,探究VGLL2在鸡生长发育过程中的分子机制。本研究所获得的主要结果如下:1、通过VGLL2在不同物种中表达数据的整合分析,发现VGLL2在不同物种中,均特异性的表达在肌肉组织中;利用qRT-PCR检测鸡VGLL2基因时空表达,发现VGLL2在肌肉中特异高表达;通过研究VGLL2基因在鸡胚胎期和出壳后肌肉中的时序表达,发现VGLL2在鸡胚胎期的表达量显著高于出壳后期(P<0.05),且在E16期表达量最高。鸡胚胎E12～E16是肌纤维形成的关键时期,推测VGLL2可能参与了鸡肌纤维形成的过程。2、利用酶消化法分离鸡原代成肌细胞,差速贴壁纯化和免疫荧光鉴定后,获得满足后续试验要求的成肌细胞。构建并包装鸡VGLL2重组腺病毒,设计合成并筛选干扰效率高的特异靶向VGLL2基因的小RNA干扰(siRNA)片段:重组腺病毒感染鸡原代成肌细胞,利用CCK8检测细胞活力,发现过表达VGLL2可以显著提高成肌细胞的活力(P<0.05):利用EdU和流式细胞术检测细胞增殖情况,发现过表达VGLL2可以抑制成肌细胞的增殖,并阻滞成肌细胞进入S期(P<0.05);干扰VGLL2则可以显著降低成肌细胞的活力(P<0.05),促进成肌细胞进入S期比例(P<0.05)。上述结果说明,VGLL2基因具有抑制鸡成肌细胞增殖的作用。3、收取不同融合度下增殖期和不同分化时期的鸡成肌细胞,检测VGLL2基因在鸡原代成肌细胞增殖及分化期表达规律。结果表明,在鸡成肌细胞分化过程中VGLL2表达量呈上升趋势;利用qRT-PCR技术检测发现,过表达VGLL2可以显著上调成肌细胞分化标记基因MyoD、MyoG和Myomaker基因的表达量(P<0.05),干扰VGLL2基因后可以显著降低成肌细胞分化标记基因MyoD、MyoG和Myomaker基因的表达量(P<0.05);免疫荧光实验结果表明,过表达VGLL2可以促进成肌细胞的融合,干扰VGLL2表达则抑制成肌细胞的融合。这些结果表明,VGLL2促进鸡成肌细胞的分化。4、纯化VGLL2基因过表达腺病毒颗粒,肌肉注射雏鸡后,检测VGLL2对鸡日增重和肌纤维特性的影响。结果表明,与对照组相比,处理组(过表达VGLL2)肌肉组织中VGLL2基因表达量和日增重显著升高(P<0.05);利用组织切片技术检测对照组和处理组肌纤维特性,结果表明,与对照组相比,处理组肌纤维直径显著增加(P<0.05)。这些结果表明,VGLL2可以通过提高雏鸡日增重和肌纤维直径来促进雏鸡肌肉的生长发育。综上所述,本研究揭示出鸡VGLL2基因通过抑制成肌细胞的增殖,促进鸡成肌细胞的分化,增加出壳个体肌纤维直径,从而促进鸡的生长发育来参与到鸡骨骼肌的发育过程中,上述结果为进一步完善中国肉鸡肌肉发育的调控网络以及分子育种改良提供理论依据。