论文部分内容阅读
目的：观察腺病毒介导的Slit2及Slit2ShRNA转染缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelial cells RPE）对人脉络膜微血管内皮细胞(Human choroidal microvascular endothelial cell,HCMEC)增殖的影响，观察外源性Slit2蛋白对人HCMEC细胞迁移和管腔形成的影响，并研究探讨Slit2/Robo4信号通路在脉络膜新生血管（Choroidalneovascularization,CNV)中的可能作用，为CNV提供新的治疗方向。方法：1.体外培养人RPE细胞、人HCMEC细胞，200μmol/L氯化钴建立化学缺氧模型，观察缺氧条件下Slit2及Slit2ShRNA转染的RPE细胞对HCMEC细胞增殖的影响；2.RT-PCR、免疫组化鉴定Slit2、Robo1、Robo4、Rac1、cdc42在HCMEC细胞上的表达；3.Western-blot检测不同浓度外源性Slit2蛋白（0ng/ml、50ng/mL、75ng/mL、100ng/mL、125ng/mL、150ng/mL）对人HCMEC细胞Robo4表达的影响；4.外源性150ng/mlSlit2对VEGF诱导的人HCMEC细胞迁移和管腔形成的影响；5. Western-blot检测Rac1、cdc42的表达。结果：1.Slit2组光吸收值(A值)在24h、48h均高于其他组(与缺氧组P=0.001，其余P=0.000），Slit2ShRNA组光吸收值(A值)在24h、48h均低于其他组（48h与缺氧组P=0.003，与空腺病毒组P=0.008，其余P=0.000）；2.Slit2、Robo4、Rac1、cdc42表达于人HCMEC细胞上；3.在外源性不同浓度的Slit2（0ng/ml、50ng/mL、75ng/mL、100ng/mL、125ng/mL、150ng/mL）作用下，随着Slit2蛋白浓度的增加，Robo4表达增加；4.外源性150ng/ml Slit2蛋白可以抑制VEGF诱导的人HCMEC细胞的迁移和管腔形成；5.实验组2中Rac1表达高于阳性对照组，差异有统计学意义（p<0.05)，阴性对照组与实验组1差异无统计学意义（p>0.05)。四组中cdc42的表达差异无明显统计学意义（p>0.05)。结论：1.Slit2的高表达可明显促进HCMEC细胞的增殖，沉默RPE细胞中的Slit2的表达后，会明显抑制HCMEC细胞的增殖。2.外源性Slit2蛋白抑制VEGF诱导的人HCMEC细胞的迁移和管腔形成，Slit2/Robo4信号通路可能通过影响下游信号分子Rac1从而达到抑制作用。