高尿酸血症是一种由于机体嘌呤代谢紊乱,导致尿酸生成过多或尿酸排泄减少,进而引起血尿酸水平高于正常水平的慢性代谢性疾病。研究表明车前子作为一种传统的利尿通淋药,在治疗高尿酸血症方面具有独特的优势和确切的疗效。课题组前期研究表明,车前子可调节甘油三酯代谢紊乱,改善大鼠肾脏功能,减轻炎症反应,有效降低高尿酸血症大鼠的尿酸水平。然而,车前子治疗高尿酸血症的药效物质基础及作用机制尚不明确,限制了其临床应用。本论文对车前子的化学成分及其在大鼠体内的原型成分及代谢产物进行了系统分析。在此基础上,结合血清药物化学与网络药理学,对车前子治疗高尿酸血症的作用机制进行了初步探究。主要研究内容如下:1.基于UPLC-QE-Orbitrap-MS技术的车前子化学成分分析超高效液相色谱串联四级杆静电场轨道阱质谱（UPLC-QE-Orbitrap-MS）具有高分辨率及高灵敏度,是研究中药及复方化学成分的重要技术之一。本论文采用UPLC-QE-Orbitrap-MS技术,结合Xcalibur数据处理软件对车前子的化学成分进行快速鉴别分析,共鉴定出39种化学成分,其中包括14种黄酮类化合物、9种苯乙醇苷类化合物、4种环烯醚萜类化合物、3种三萜类化合物、2种生物碱类化合物、3种有机酸类化合物、2种脂肪酸类化合物、1种糖醇类化合物和1种苯丙酸苷类化合物,为进一步研究车前子体内化学成分奠定了基础。2.基于UPLC-QE-Orbitrap-MS技术的车前子入血移行成分分析本论文基于中药血清药物化学理论,利用UPLC-QE-Orbitrap-MS技术对车前子的入血移行成分进行定性分析。灌胃车前子提取液后,在大鼠血浆中共鉴定出41种药源性成分,其中包括毛蕊花糖苷、京尼平苷酸与木犀草苷等13种原型成分,另外28种为药物成分在大鼠体内的代谢产物。该研究初步明确了车前子治疗高尿酸血症的潜在药效物质,为后续研究车前子治疗高尿酸血症的作用机制提供了实验依据。3.基于UPLC-QE-Orbitrap-MS技术的车前子在大鼠尿液和粪便中的代谢成分分析本论文利用UPLC-QE-Orbitrap-MS技术检测灌胃车前子后大鼠的尿液和粪便样品,并分析鉴别其中的药源性成分。从大鼠尿液中鉴定出了 58种药源性成分,其中原型成分13种,代谢成分45种;在大鼠粪便中鉴别得到了 58种药源性成分,其中原型成分17种,代谢成分41种。对车前子在大鼠体内的代谢途径进行分析,发现其在体内主要发生脱氢、羟基化、甲基化及葡萄糖醛酸化等代谢反应。4.基于网络药理学及分子对接技术的车前子治疗高尿酸血症的作用机制初探基于车前子入血移行成分,运用网络药理学与分子对接技术对车前子治疗高尿酸血症的机制进行初步探究。以车前子的13个入血原型成分为研究对象,收集其作用靶点,与高尿酸血症疾病靶点映射取交集后,得到成分治疗疾病的85个潜在靶点,经PPI拓扑分析,筛选得到了 ALB、TNF及IL6等8个关键靶点。利用DAVID网站进行生物富集分析及通路分析,富集结果显示,85个潜在靶点主要参与氧化还原、ERK1和ERK2级联的正调节等生物进程,调控TNK、HIF-1及PI3K-Akt等信号通路。综上所述,本论文应用UPLC-QE-Orbitrap-MS技术建立了车前子及其生物样品的液相色谱-质谱联用分析方法,通过车前子提取物化学成分及灌胃车前子后大鼠血浆、尿液及粪便中的药源性成分的检测分析,揭示了车前子发挥药效作用的物质基础。同时,利用网络药理学及分子对接技术,初步探讨了车前子治疗高尿酸血症的分子作用机制,为深入研究其降尿酸机制提供了科学依据。