目的:于体外对新西兰白兔骨髓间充质干细胞进行培养,分别采用密度梯度离心法和全骨髓贴壁培养法,并对两种不同方法进行比较。应用培养的骨髓间充质干细胞和羊膜构建结膜缺损的生物学修复材料。方法:1正常的3月龄的新西兰白兔,在无菌条件下,行骨髓穿刺获得新西兰白兔骨髓,分别采用全骨髓贴壁培养法和密度梯度离心法对骨髓间充质干细胞进行分离、纯化、培养,并进行传代观察。2分别将第3代骨髓间充质干细胞接种于预置盖玻片的六孔培养板中,细胞90%以上融合时,对细胞爬片进行免疫组化染色,并对两种方法培养细胞的免疫组织化学结果进行对比。3将生长状态良好的第3代骨髓间充质干细胞接种到羊膜基底面,待细胞融合,取材后于扫描电镜下观察细胞与羊膜的贴合状况,于透射电镜下观察细胞情况。结果:1两种方法培养的间充质干细胞形态相似。原代培养的新西兰白兔骨髓间充质干细胞呈簇状、贴壁呈集落生长,细胞形态为梭形、多角形,传代后细胞形态较为均一,分布均匀。细胞增长活跃、传代周期短。2免疫组织化学染色CD34(-)、CD44(+)。3全骨髓培养法较密度梯度离心法CD44的平均光密度值低,CD34的平均光密度值高。4电镜下观察到细胞可以生长于羊膜基底面,与羊膜良好贴合。结论:1利用全骨髓贴壁培养法和密度梯度离心法均可以得到骨髓间充质干细胞,并可以传代,细胞生长状态良好。2免疫组织化学结果支持所获得的细胞为骨髓间充质干细胞。3全骨髓贴壁培养法较密度梯度离心法培养的细胞纯度低。4羊膜可以作为骨髓间充质干细胞载体来构建结膜缺损修复材料。