桑黄黄酮类成分及制剂研究

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桑黄属担子菌亚门、多孔菌科,是一种珍贵的药用真菌。在我国传统中药中用于治疗痢疾、盗汗、血崩等。日本则作为利尿剂使用。研究表明,桑黄具有抗肿瘤、增强免疫以及抗纤维化作用。该真菌中含有三萜、多糖和黄酮等活性成分。桑黄是少有的含有黄酮化合物的药用真菌,黄酮类化合物具有抗氧化、扩张血管、降血脂和抗癌作用。本文研究总黄酮的提取纯化、体内外药效以及制剂工艺,为桑黄菌开发利用提供实验依据。主要的研究内容如下:1.以总黄酮提取率为考察指标,比较五个品种中桑黄总黄酮的含量,结果:桑桑黄>杨桑黄>白桦桑黄>黑桦桑黄>松桑黄。2.采用超声辅助提取,设计正交试验,对桑黄中黄酮的提取工艺进行研究。结果:以总黄酮提取率为指标,超声法提取桑黄总黄酮的最佳工艺为40-60目细粉,乙醇浓度70%,提取温度45℃,料液比1:30,提取时间20 min,超声功率50W,3.将桑黄总黄酮粗提物分别经大孔吸附树脂、聚酰胺、正丁醇等方法预处理后,通过Fe3+还原实验、还原力测定、Fe2+络合实验、DPPH清除率实验等方法来进行抗氧化活性研究,与同等质量的桑黄总黄酮粗提物和桑黄多糖的抗氧化活性进行对比,研究桑黄总黄酮各种纯化方法对抗氧化活性的影响。结果显示粗品抗氧化活性较强,纯化后提高了黄酮的含量,抗氧化活性并没有提高,其中大孔吸附树脂纯化的精制黄酮的纯度较高,抗氧化活性也高,桑黄多糖的抗氧化活性最低。4.建立D-半乳糖衰老小鼠模型后,各给药组小鼠用桑黄醇提物和水提物分别灌胃一段时间后,检测小鼠脑组织中一氧化氮合酶(NOS)活力、一氧化氮(NO)含量。与衰老模型对照组相比,给药组的NOS活力和NO含量均明显降低,水提部位和醇提部位给药效果没有显著差异;通过灌胃高脂饲料建立小鼠高血脂症模型后,按照高、中、低剂量灌胃桑黄总黄酮提取物,测定体重、脏器系数、血清SOD以及脑NO等指标。结果表明桑黄总黄酮具有明显的降血脂作用。5.以崩解时限为指标,采用单因素考察和正交设计实验,对桑黄总黄酮分散片处方及制剂工艺进行筛选、优化。最优处方和工艺是MCC:乳糖(6:2)为填充剂,5%PVPK17乙醇溶为粘合剂,崩解剂为立崩,含量7%,压力3kg。按优选处方和工艺制备的桑黄总黄酮分散片符合《中国药典》中有关分散片的要求。6.选用氯化铝为受电子试剂,采用荷移分光光度法进行总黄酮含量测定,并进行方法学考察。结果A=0.028C-0.001,R2=0.9994,线性范围为1-40μg·ml-1,平均回收率为99.59%。7.建立RP-HPLC测定桑黄黄酮分散片中柚皮素含量的方法:YWG-C18(4.6mm×150mm,10μm)色谱柱,检测波长288 nm,柱温为40℃,流动相为水-甲醇-冰醋酸(59:40:1),流速为0.6ml·min-1。标准曲线为A=9.499×105C+698.8,回归系数R2=0.9994,浓度范围1-100μg·ml-1,方法精密度RSD为1.1%(n=6);平均回收率为103.3%,RSD为1.5%(n=9);重复性实验RSD为0.3%(n=6):样品在10h内测量结果稳定;含量为0.0343%,RSD为0.7%(n=6)。
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