体外培养树突状细胞的实验研究

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目的:提取神经胶质瘤患者外周血分离出单核细胞,进行体外培养、诱导产生树突状细胞,并探讨细胞因子对树突状细胞诱导、分化成熟的影响,为最终临床应用树突状细胞免疫治疗神经胶质瘤打下基础。 方法:临床收集确诊为神经胶质瘤的患者静脉血共20份,每份20ml,经淋巴细胞分离液梯度分离出单个核细胞(PBMC),贴壁法获得单核细胞后,每个样本均分为两份,共两组,分别加入GM-CSF+IL-4和GM-CSF+IL-4+Flt3-L进行诱导,在相同条件下进行体外培养,隔日半量换液,补充细胞因子,共7天,用倒置显微镜观察其形态,并进行流式细胞仪检测其表面标志,对培养结果在获得率、纯度和细胞表型三方面进行对比。 结果:应用GM-CSF+IL-4和GM-CSF+IL-4+Flt3-L两种培养方法均可诱导产生树突状细胞,而且在树突状细胞的获得率和纯度方面无统计学差异,经流式细胞仪检测,应用GM-CSF+IL-4组所获得的树突状细胞符合不成熟树突状细胞的表型,而GM-CSF+IL-4+Flt3-L组所诱导的树突状细胞表达更高比例的成熟标志CD83,趋向于成熟的树突状细胞表型。 结论:从胶质瘤患者外周血中分离出的单核细胞,经GM-CSF和IL-4刺激后,可以诱导、扩增出大量的树突状细胞,该细胞具有典型的树突状细胞的形态;由GM-CSF和IL-4诱导产生不成熟的树突状细胞,存在Flt3-L时可诱导生成成熟的树突状细胞。
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