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口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease, FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus, FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触传染性动物疫病,是全球范围内家畜及其产品贸易最大的羁绊。FMDV通过逃避宿主的免疫监视建立持续性感染,使患畜持续向外界排毒,成为传染源。VP1是FMDV主要的结构蛋白,可参与病毒入侵和免疫逃逸,但VP1在细胞中发挥作用的机理尚不清楚。本研究通过寻找与VP1相互作用的宿主靶蛋白,初步阐明VP1在FMDV引起的免疫抑制中所发挥的作用。本研究通过双荧光素酶报告基因检测法和荧光定量PCR发现FMDV VP1显著抑制Ⅰ型干扰素和NF-κB的活化。因此,推测VP1在FMDV抑制宿主细胞Ⅰ型干扰素表达的过程中起着关键作用。为了探索FMDV VP1抑制Ⅰ型干扰素产生的分子机理,应用酵母双杂交技术寻找与FMDVVP1相互作用的宿主细胞靶蛋白,结果显示VP1与可溶性耐药相关钙结合蛋白(soluble resistance-related calcium-binding protein, Sorcin)存在着相互作用,并通过免疫共沉淀和激光共聚焦技术验证了两者在细胞中的相互作用。之后,利用RNAi沉默细胞内源性Sorcin蛋白的表达,发现Sorcin是VP1抑制细胞Ⅰ型干扰素产生所必需的蛋白。进一步研究发现：Sorcin会影响细胞中Ⅰ型干扰素和NF-κB的转录激活水平,表明Sorcin是免疫信号传导通路中的一个负调控分子。此外,构建了Sorcin基因敲除小鼠,以期在体内验证Sorcin的作用,初步的实验结果表明：基因敲除小鼠较野生型小鼠表现出更为明显的炎症反应。为了揭示Sorcin负调控的机制,本文利用酵母双杂交技术,以Sorcin蛋白为诱饵,筛选人白细胞文库中与其相互作用的蛋白,找到新的靶蛋白信号传导和转录激活因子-3(signal transducer and activator of transcription3, STAT3),并通过免疫共沉淀和激光共聚焦实验验证两者的相互作用,证明STAT3是Sorcin在免疫信号传递通路中下游的接头分子。综上所述,本研究发现在FMDV感染宿主细胞的过程中,VP1蛋白通过与宿主细胞蛋白Sorcin的互作,进而活化转录因子STAT3, STAT3参与负调控NF-κB信号通路,最终抑制宿主细胞Ⅰ型干扰素的产生,为深入了解FMDV造成持续感染的分子机理提供了重要参考。