成骨细胞分化的关键调节因子Osterix乙酰化修饰的研究

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转录因子Osterix (Osx)是成骨细胞分化和骨发育中的关键调节因子。我们以前的研究已经证明Osx存在泛素化修饰。在本研究中,我们发现乙酰化修饰也参与了Osx功能的调节。我们的数据表明,去乙酰化酶抑制剂TSA和SAHA处理以剂量依赖的方式增加内源性和外源性的Osx的蛋白水平。细胞免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)实验证明乙酰化酶p300/CBP参与了Osx的乙酰化修饰,且CBP的作用更强。免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation, Co-IP)和细胞免疫荧光技术(Immunofluorescence, IF)证明CBP和Osx存在相互作用和共定位。我们鉴定了Osx的乙酰化位点为K307和K312。此外,我们还发现去乙酰化酶]3DAC4也参与了Osx的功能调节,并且HDAC4和Osx也存在相互作用和共定位。蛋白质合成抑制剂CHX处理的结果表明,乙酰化增加了Osx的蛋白稳定性。电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)的结果表明,乙酰化修饰增强了Osx的DNA结合能力。荧光素酶报告基因实验和Real-time PCR的结果表明,乙酰化增加了作为转录因子的Osx的反式激活活性。总之,我们的结果首次证明p300/CBP介导的乙酰化和HDAC4介导的去乙酰化在Osx的功能调节中发挥重要作用。
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