豆薯种子中一种抗植物病毒蛋白的分离纯化、晶体生长、数据收集和初步结晶学研究

来源 :中国科学院福建物质结构研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kingwaaaa
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该文从豆科植物豆薯(Pachyrrhizus erosus)的种子内,经磷酸缓冲液粗提,SP-Sepharose Fast Flow柱,CM-Sepharose Fast Flow柱和Sephacryl S-200柱层析,得到了一种新的蛋白组分PE4.在SDS-PAGE和IEF电泳上均呈单一纯,在紫外区表现典型的蛋白吸收光谱.非还原的SDS-PAGE显示该蛋白的分子量为15kDa,还原的SDS-PAGE显示该蛋白的分子量明显小于14kDa,初步表明PE4中含有二硫键.酸解法测定了蛋白PE4的氨基酸组成,结果显示蛋白PE4中存在7个半胱氨酸,完全可以用来形成二硫键.IEF实验表明PE4的等电点为8.2.抗植物病毒活性实验显示PE4对烟草花叶病毒(TMV)具有抑制作用,是一个新的抗植物病毒蛋白.PE4蛋白用悬滴气相扩散法获得结晶.晶体最适的生长条件为20﹪(w/v)PEG6000,0.1M磷酸缓冲液(PH7.4).晶体最大线度可达1.0mm×0.6mm×0.5mm.
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