研究目的　　脓毒症所致的多脏器功能衰竭(MOF)，在危重症医学领域仍是危害人类健康的重大难题，而脓毒性肝损伤目前在临床上病死率一直居高不下。因此亟待探索其发病机制和有效的治疗药物以改善预后。胡黄连苷Ⅱ(PicrosideⅡ，PicⅡ)的抗炎、抗细胞凋亡等药理作用目前已得到公认，而对脓毒性肝损伤研究甚少。本课题拟通过腹腔注射脂多糖/D-氨基半乳糖苷(LPS/D-GalN)构建经典的急性肝损伤(ALI)动物模型，采用荧光定量PCR、流式细胞术、酶联免疫吸附实验等实验技术，观察胡黄连苷Ⅱ对急性脓毒性肝损伤的保护作用;体外实验探讨胡黄连苷Ⅱ抗细胞凋亡、焦亡的作用机制。　　研究方法　　1.胡黄连苷Ⅱ对LPS/D-GalN诱导的小鼠急性脓毒性肝损伤的影响　　(1)C57BL/6雄性小鼠40只，随机分为生理盐水(NS)组，ALI组、ALI+ PicⅡ组、PicⅡ组，每组10只。ALI+ PicⅡ组及PicⅡ组分别于LPS/D-GalN注射前24h，12h，6h，1h四个时间点腹腔注射20mg/kg胡黄连苷Ⅱ，NS组和ALI组同时间同剂量腹腔注射NS;接下来ALI+ PicⅡ组与ALI组腹腔注射LPS10μg/只和D-GalN800mg/kg，NS组和PicⅡ组腹腔注射等剂量的NS，观察造模后16h内小鼠生存率。　　(2) C57BL/6雄性小鼠12只，分为上述4组，每组3只。处理同上，于造模后5h眼球静脉采血，颈脱臼处死小鼠。分别检测血清炎症因子TNF-α、IL-6，ALT、AST水平;观察各组小鼠肝组织大体形态，肝HE染色，检测肝组织TNF-α、IL-6mRNA表达水平，综合评价各组肝功能状态。提取各组剩余肝组织的肝细胞，流式细胞术(FCM)检测AnnexinⅤ-PE，caspase-1-FITC，7AAD的荧光强度变化;罗丹明123检测线粒体膜电位变化;Western Blot检测caspase-3活化水平，pro-caspase-1，caspase-1(p20)蛋白的表达。　　2.胡黄连苷Ⅱ抗凋亡、焦亡的作用机制　　(1)提取C57BL/6雄性小鼠腹腔巨噬细胞，分为对照组（A组），胡黄连苷Ⅱ组(B组)，LPS组（C组），LPS+胡黄连苷Ⅱ组（D组）。Western Blot检测pJNK、Bcl-2/Bax表达，探索PicⅡ抗细胞凋亡的分子机制。　　(2)提取C57BL/6雄性小鼠腹腔巨噬细胞，分为对照组（E组），胡黄连苷Ⅱ组口组），LPS+ATP组（G组），LPS+ATP+胡黄连苷Ⅱ组（H组）。ELISA检测上清IL-1β、IL-18水平;Western Blot检测pro-caspase-1，caspase-1(p20)，NLRP3、ASC变化，探索PicⅡ抗细胞焦亡的分子机制。　　研究结果　　1.与NS组相比，ALI组小鼠16h生存率明显下降，ALI+ PicⅡ组较ALI组升高。血清TNF-α、IL-6，ALT、AST含量，肝组织TNF-α、IL-6 mRNA在ALI组表达显著升高(P＜0.05); ALI+ PicⅡ组上述各指标比ALI组下降(P＜0.05)，ALI+ PicⅡ组比PicⅡ组高(P＜0.05）。　　2.肝脏外观:ALI组肝脏肿大，被膜紧张，明显淤血和出血，而ALI+ PicⅡ组仅为轻度淤血。肝脏病理切片经HE染色显示ALI组肝细胞坏死，大量炎症细胞浸润和充血，ALI+ PicⅡ组则表现为轻度的病理改变。肝细胞经AnnexinⅤ/7AAD染色后，ALI组肝细胞凋亡率明显高于NS组(P＜0.05)，ALI+ PicⅡ组较ALI组凋亡率下降（P＜0.05）。罗丹明123染色显示ALI组阳性率明显高于NS组(P＜0.05)，ALI+ PicⅡ组阳性率低于PicⅡ组（P＜0.05）。经caspase-1/7AAD染色结果显示:ALI组肝细胞的焦亡率明显高于NS组(P＜0.05)，ALI+PicⅡ组较ALI组下降，但高于PicⅡ组(P＜0.05)。四组pro-caspase-3表达差异无统计学意义(P＞0.05），ALI组活化的caspase-3明显高于NS组(P＜0.05），ALI+ PicⅡ组高于PicⅡ组（P＜0.05）;各组pro-caspase-1表达含量无统计学意义(p＞0.05)。ALI组活化的caspase-1表达明显高于NS组(P＜0.05)，ALI+ PicⅡ组高于PicⅡ组(P＜0.05)。　　3.体外细胞实验:细胞凋亡模型经胡黄连苷Ⅱ干预后显示:B组p-JNK明显高于A组，C组比B组下降，C组比D组表达增高(P＜0.05）;B组Bcl-2/Bax明显低于A组，C组比B组升高，C组比D组表达增高(p＜0.05);细胞焦亡模型经胡黄连苷Ⅱ干预后显示:F组细胞上清IL-1β、IL-18浓度明显高于E组(P＜0.05），G组低于F组(P＜0.05)。Western Blot检测NLRP3，ASC，caspase-1(p20)变化:F组明显高于E组(P＜0.05），G组比F组下降(P＜0.05)，G组比H组高(P＜0.05)。　　结论　　1.胡黄连苷Ⅱ抑制LPS/D-GalN诱导的小鼠肝损伤的炎症反应，减轻肝细胞的凋亡和焦亡，改善脓毒症小鼠肝损伤，降低脓毒症小鼠肝损伤的死亡率。　　2.胡黄连苷Ⅱ抑制凋亡的机制可能是通过线粒体内源性途径抑制Bax，促进Bcl-2表达，从而抑制caspase-3活性;抑制细胞焦亡的可能机制为通过抑制NLRP3炎性小体的活化，从而抑制IL-1β和IL-18释放，保护急性脓毒性肝损伤。