植物激素是植物体内合成的一系列痕量有机化合物,其对植物生长发育具有重要的调控作用。植物内源激素对植物体生长发育任一生理过程的调节,都不是单一激素作用的结果,而是多种激素之间相互作用的结果。因此,开展生理水平的多种内源激素检测及相关的前处理技术平台的研究是探索植物激素生理作用的基础工作。水稻基质的复杂性以及待测物的痕量、动态不仅给内源激素分析带来了困难,同时基质共萃取物会引起基质效应,所以如何将内源激素从水稻中高效分离净化是内源激素测定的关键。本文基于混合模式固相萃取净化技术,筛选80%甲醇水溶液等有机溶剂提取水稻中内源激素,优化混合模式固相萃取净化条件。通过对提取、分离和净化条件的摸索,结合固相萃取技术建立了液相色谱-质谱法对水稻中37种内源激素的检测方法,并评价检测中的基质效应。本文的主要研究结果如下:1.研究并建立了37种内源激素的HPLC-MS/MS分析方法。主要研究了有机酸种类、柱温和梯度陡度等影响色谱分离中容量因子(k)、分离度(R)的重要因素,以解决同分异构体的色谱分离。研究表明当水相中不添加任何有机酸,即水相为5mM甲酸铵时,细胞分裂素葡萄糖结合物(Z7G-Z9G-ZOG、DZ7G-DZ9G-DZOG)可以达到基线分离,分离度大于2;而梯度陡度较柱温对赤霉素同系物(GA1-GA3、GA4-GA7、GA9-GA53)色谱分离影响较明显,分离度近似变化了50%-130%。而当柱温为40℃、梯度陡度为4%/min能基本保证赤霉素同系物的色谱分离,而GA1-GA3分离度仍旧小于0.5;同时还研究了流动相组成、质谱条件对方法灵敏度的影响。研究表明甲醇-甲酸铵(5mM)流动相体系在Dynamic MRM采集模式下不仅能保证正离子模式下同分异构体的分离,同时具有较好的质谱响应值,灵敏度可以提高5-10倍;而利用建立的检测方法对37种内源激素进行5μg/l、25μg/l、50μg/l 3个水平的加标回收实验(n=3),其平均回收率范围为61%-109%之间,相对标准偏差小于16% ; 37种内源激素的方法检出限( S/N=3 )为0.0005μg/l-25μg/l。2.建立了以80%甲醇水溶液为提取溶剂、混合模式固相萃取净化为水稻中内源激素核心技术的前处理方法。对提取溶剂、浸提时间、固相萃取柱上样液的组成和洗脱剂的组成等影响内源激素提取效率、分离净化的重要因素进行了研究。研究表明采用80%甲醇水溶液作为提取溶剂,提取后浸提12h得到Z9G的提取量,是直接上机测定的2倍;采用稀释提取液使甲醇的体积分数为33%可保证混合阴离子、混合阳离子交换反相固相萃取柱对内源激素的最大滞留。该方法操作简单、省时,并简化了常规做法的浓缩步骤。3.评价了检测中的基质效应,并采用建立的混合模式固相萃取柱对水稻基质进行净化以考察对基质效应的消除作用。研究表明基质效应主要取决于化合物性质、不同基质介质和不同的添标水平。不同的化合物在不同基质介质中均具有不同程度的基质效应,且随浓度的降低基质效应越大,特别是赤霉素、生长素和脱落酸。而通过混合模式固相萃取净化可以减少引起基质效应的共流出物,并对37种内源激素表现良好的分离选择性,回收率在77%-109%之间,但当添标水平为1μg/l以考察低浓度条件下固相萃取净化对基质效应的影响时,ZROG回收率为63%,而由于接近GA3、GA20的定量限而使得检测结果失真,回收率小于40%。