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本文以中药救必应为研究对象,提取救必应总黄酮,研究其对多重耐药菌的抑菌作用。以产超广谱β-内酿胺酶(Extended Spectrumβ3-]actamases,ESBLs)大肠杆菌为受试菌,采用二倍微量稀释法测定救必应总黄酮及抗菌药对产ESBLs大肠杆菌的最小抑菌浓度;通过CFU法即平板菌落计数法绘制产ESBLs大肠杆菌的正常生长曲线及不同浓度救必应总黄酮作用下的生长曲线;采用联合传代法、微量棋盘稀释法测定救必应总黄酮联合抗菌药后的抑菌效果及联合作用方式;采用琼脂糖凝胶电泳的方法检测经救必应总黄酮作用后大肠杆菌基因组DNA含量的变化;采用Annexin V和PI双染色法检测救必应总黄酮能否引起大肠杆菌发生凋亡及引起凋亡的比例;采用蛋白质谱分析救必应总黄酮对大肠杆菌主要蛋白条带的影响。试验主要结果如下:1、临床收集病料,分离到大肠杆菌、链球菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌、普通变形杆菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌等7种主要多重耐药细菌。分离到的大肠杆菌同时含有fosA3、CTX-M、TEM等三种耐药基因型,为产ESBLs大肠杆菌。2、救必应总黄酮对大肠杆菌、链球菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌、普通变形杆菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌等7种耐药受试菌均有抑菌作用,MICs分别为:80mg/mL、20mg/mL、40mg/mL、40mg/mL、40mg/mL、20mg/mL、10mg/mL。救必应总黄酮可明显抑制产ESBLs大肠杆菌的生长,且抑制程度与救必应总黄酮的浓度成正相关;救必应总黄酮与抗菌药联合作用于不同耐药细菌,对于不同的耐药细菌,救必应总黄酮能与不同的抗菌药出现协同或相加的联合作用形式。3、产ESBLs大肠杆菌与救必应总黄酮共培养后,提取细菌基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳,发现试验组的细菌基因组DNA含量与空白对照组相比明显下降,与生长曲线的变化情况一致。4、采用Annexin-V和PI双染色法,利用流式细胞仪检测凋亡细菌的比例,发现加入救必应总黄酮之后,细菌凋亡的比例增加,并且具有统计学意义,浓度为1/2 MIC的救必应总黄酮引起的Annexin-V染色阳性比例小于经1 MIC救必应总黄酮作用的试验组。5、救必应总黄酮可以抑制或消除产ESBLs大肠杆菌总蛋白的合成,经SDS-PAGE凝胶电泳试验得知,主要影响约35～40 kDa片段大小的蛋白条带,经基质辅助激光解吸附串联飞行时间质谱仪进行蛋白质谱分析,主要影响果糖磷酸醛缩酶和ADP-甘油-甘露聚糖-6-差向异构酶两种蛋白含量。