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本试验用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)检测了不同体重阶段(10kg、20kg、35kg、50kg、80kg、100kg)荣昌猪阉公猪肝脏、心脏和腰大肌三种组织的DNA甲基化水平,探讨了这三种组织在不同体重阶段基因组DNA甲基化水平的变化规律,为正确认识生长发育过程中的表观遗传调控作用提供基础数据。研究结果如下:1.HPLC技术体系的建立与优化用核酸酶T1纯化后的DNA,高温解链后在核酸酶P1和牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)的作用下水解为单一的脱氧核苷混合物,通过2′-脱氧胞苷(dC)、2′-脱氧腺苷(dA)、2′-脱氧鸟苷(dG)、2′-脱氧胸苷(dr)和5-甲基脱氧胞苷(5-mc)五种脱氧核苷混合的标准品进行对比,且进行了平行试验的测定,各平行组之间变异系数接近。得出最优化的色谱条件为色谱柱:symmetryshieldTM RP18柱(150×3.9mm,5μm);流动相:0.1%(v/v)磷酸(H3PO4),并用三乙胺调pH值为3.0;流速:1.0mL/mim检测器波长:273nm;柱温:25℃;灵敏度:2.0000AUFS;进样量20μL。方法简便可靠,20min内可完全分离。2.基因组DNA甲基化水平在不同生长发育阶段和不同组织间的变化趋势DNA甲基化水平表现出随体重增加逐渐降低的变化趋势。10kg体重阶段DNA甲基化水平极显著高于其余各体重阶段(p<0.01);20kg体重阶段DNA甲基化水平极显著高于80kg、100kg体重阶段(p<0.01);35kg、50kg和80kg体重阶段DNA甲基化水平极显著高于100kg体重阶段(p<0.01);其余体重阶段间DNA甲基化水平差异不显著(p>0.05)。体重与肝脏、心脏和腰大肌组织中DNA甲基化水平的一元线性回归方程为:腰大肌y=-0.000241x+0.0419(R2=0.4677),肝脏y=-0.000174x+0.0363(R2=0.5679),心脏y=-0.000155x+0.0346(R2=0.3514)。组织类型、体重以及它们的交互作用对DNA甲基化水平均有极显著影响(p<0.01),贡献大小顺序为组织(η2=0.395)>体重(η2=0.393)>组织*体重(η2=0.157)。不同组织类型DNA甲基化水平下降的顺序为腰大肌>肝脏>心脏。