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目的:采用流行病学、血清学和分子生物学相结合的方法,对河北省HFRS病原进行分型,以期阐明疫区病原的型别特征及分布情况,为更为有效地诊疗和防控该病提供科学依据。
方法:
1.总结河北省1981-2005年HFRS疫情资料,统计分析区域分布特征及发病季节特征。
2.疫源地调查,夹夜法捕鼠,无菌取鼠肺;
3.用冷冻切片机切鼠肺,冷丙酮固定后,间接免疫荧光法筛选汉坦病毒阳性鼠肺,总结分析疫源地特征;
4.从阳性鼠肺中提取总RNA,逆转录套式PCR扩增,进行基因分型;
5.在各重点疫区采集病人或疑似病人早期血液标本,提取总RNA,逆转录套式PCR扩增,进行基因分型;
6.选择代表性疫区监测点采集病人恢复期血清,采用血凝抑制试验(HI)进行血清分型7 选择代表性疫区HFRS病毒株,采用属、型和亚属特异性McAb进行抗原反应谱分析。
结果:
1.全省HFRS疫区广泛存在,11个地市均有发病,发病高密度县(市、区)主要集中在中部、南部和东北部地区,体现出既高度散发又相对集中的特点。从疫情月分布构成情况看,主要集中于3-6月份,占全年总发病数的65.73%,有明显的春夏季发病高峰。
2.2004~2005两年鼠间疫情资料显示,全省各地宅区鼠密度明显高于野外,宅区鼠种主要为褐家鼠和小家鼠,分别占宅区总捕获鼠种的 88.41%和10.85%;野外鼠种主要为褐家鼠、黑线姬鼠和大仓鼠,分别占野外总捕获鼠种的50.61%、13.72%和11.28%。河北省的优势鼠种为褐家鼠。从全省各地鼠带毒率分布情况看,我省肾综合征出血热疫源地带毒鼠主要以宅区褐家鼠为主,其次为宅区小家鼠,野外带毒鼠不是主要传染源。
3.对河北省汉坦病毒阳性鼠肺35份同时用 SEO 型和HTN型分型引物进行RF-nested PCR扩增,产物经1%的琼脂糖凝胶电泳后显示32份阳性鼠肺所携带汉坦病毒均为SEO型,未发现HTN型。
4.从小家鼠、田鼠两个河北省的非优势鼠种中扩增出SEO型特异性条带,证明它们携带SEO型汉坦病毒,再次证明不同鼠种可携带同型汉坦病毒,存在“宿主溢出”现象。
5.48份患者早期血清标本用G1片段SEO型和HTN型分型引物分别进行扩增,12份经RT-nested PCR内套引物扩增后证实为SEO型,未发现HTN型。提示河北省人感染汉坦病毒以SEO型为主。
6.88份患者恢复期血清标本经HI法检测均呈阳性。依分型标准,Ⅱ型血清76份,占总数的86.36%;Ⅰ型1份,占1.14%,来源于秦皇岛;未定型11份,占总数的12.5%。在未定型中,以秦皇岛所占比例最高,邢台次之,石家庄最低。
7.采用27株McAb对6株病毒株进行抗原反应谱分析显示,毒株均与多数属特异性和Ⅱ型特异性McAb反应。与Ⅰ型.McAb除S12同8F3反应阳性外,其它5株反应均为阴性,都属于Ⅱ型病毒。各毒株间抗原性不尽相同,有的差异较大。
结论:
1.河北省各地HFRS疫区是较为典型的Ⅱ型HRS疫区,但不排除Ⅰ型病毒感染在局部地区的少量存在。
2.褐家鼠是河北省的优势鼠种,并且是河北省HFRS的主要传染源。
3.河北省代表性疫区宿主动物所携带的汉坦病毒血清型和基因型以Ⅱ型为主,Ⅱ型病毒是河北省HFRS病毒的优势型别,是造成病人感染和疫情广泛存在的主要型别。
4.河北省Ⅱ型HFRS病毒抗原存在复杂性。
5.河北省野外宿主动物可携带Ⅱ型病毒。不同鼠种可携带同型汉坦病毒,存在“宿主溢出”现象。
6.应用套式RT-PCR对HFRS病毒进行基因分型,与血清学分型结果一致。套式RT-PCR对于HFRS病毒分型来讲,是一种可行的方法。