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背景胆管癌早期诊断技术的改进是提高胆管癌疗效的关键因素之一。本课题组前期工作已在转录水平证实hFXYD6为胆管癌分化相关抗原。通过对FXYD6蛋白与胆管癌关系的逐步揭示，在为胆管癌早期诊断提供新的肿瘤标志物同时，也有望对胆管癌的发生演进发展有进一步认识。目的1．制备兔抗人FXYD6蛋白多克隆抗体。2．比较hFXYD6 mRNA、蛋白质在不同分化胆管癌组织的表达差异。3．探讨hFXYD6反义核酸对人胆管癌细胞体外增殖和侵袭能力的影响。方法1．通过B细胞表位分析，设计hFXYD6抗原多肽，经原核表达、蛋白纯化、动物免疫、抗体纯化等过程，制备兔抗人hFXYD6蛋白多克隆抗体。2．采用SYBR? GreenⅠ荧光定量Real Time PCR及免疫组化方法检测不同分化胆管癌hFXYD6 mRNA及表达差异。3．通过反义核酸技术研究hFXYD6蛋白与人胆管癌细胞增殖侵袭关系。构建hFXYD6反义核酸真核表达载体pcDNA3.1（-）／hFXYD6（-）并转染人胆管癌QBC939细胞，同时设pcDNA3.1（-）空载对照组和空白对照组。Real Time PCR和荧光免疫组化鉴定转染结果；MTT、平板克隆形成实验检测细胞体外增殖活性；流式细胞仪检测细胞周期；Transwell侵袭小室模型检测细胞体外侵袭能力。结果1．经ELISA及免疫组化证实，成功制备高效价兔抗人FXYD6蛋白多克隆抗体。2．SYBR? GreenⅠ荧光定量Real Time PCR结果表明：人FXYD6基因在正常胆管、高分化胆管癌及低分化胆管癌均存在表达；低分化组高于高分化组（P＜0.001），高分化组高于正常组（P＜0.001）。免疫组化支持这一结果。3．与空白组和空载组比较，反义组细胞hFXYD6 mRNA及蛋白表达量降低；细胞群体倍增时间增加（46.8h vs 34.5h，35.3h），细胞克隆形成率降低（24.3％±5.3％vs 61.0％±8.5％，58.0％±5.6％；P值均＜0.001）；细胞周期中G1期细胞比例明显升高（66.4％±2.9％vs 33.5％±2.3％，39.4％±3.7％；P值均＜0.001），S期比例明显减少（18.6％±1.6％vs 36.2％±2.1％，34.1％±1.6％；P值均＜0.001）；Transwell侵袭小室中24h穿膜细胞数无显著改变（32.8±6.2 vs 34.4±5.3，29.4±5.2；分别为P=0.659，P=0.355）。空白组和空载组细胞间均无明显差异。结论1．hFXYD6与胆管癌分化相关，从正常胆管、高分化胆管癌到低分化胆管癌，hFXYD6表达量依次递增。2．hFXYD6反义核酸抑制人胆管癌QBC939细胞体外增殖活性，但对其侵袭能力无明显影响。